买专利卖专利找龙图腾，真高效！ 查专利查商标用IPTOP,全免费！专利年费监控用IP管家,真方便！

摘要：本发明提供了一种侵袭性念珠菌感染模型的构建方法，包括以下步骤：S1、选取实验鼠、S2、药物制取、S3、预处理、S4、观察菌载量、S5、念珠菌培育处理、S6、灌胃给药、S7、监测状态评估。该方法能够模拟临床念珠菌感染患者自消化道定植念珠菌易位播散导致侵袭性感染的真实状态，更加贴近临床实际，本技术通过前期抗生素预处理以减少实验小鼠消化道原生菌群的种类和丰度，随后经灌胃实现念珠菌消化道定植，在诱导剂作用下诱导定植念珠菌经消化道侵袭播散，该技术点，可成功构建侵袭性念珠菌感染小鼠模型，本模型可高度还原临床侵袭性念珠菌感染的风险因素及致病过程，具有良好的应用前景。

主权项：1.一种侵袭性念珠菌感染模型的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、选取实验鼠；选取6-8周龄雌性KM小鼠，体重18-30g，将小鼠至于SPF级饲养环境，正常进食进水适应性饲养5天；S2、药物制取；称取青霉素G钠、硫酸链霉素、盐酸万古霉素、两性霉素B干粉，将前三种药物其溶解于30ml生理盐水中，将两性霉素B用DMSO溶解直至刚好不可见固体可溶物，将两性霉素B的DMSO溶液与上述生理盐水混溶，加水补足40ml，分装后置于4℃保存；S3、预处理；前期用抗生素溶液对实验小鼠进行灌胃，达到清扫消化道正常菌群的目的，对实验小鼠进行称重，取上述抗生素混合液进行灌胃处理，单次灌胃100-300μl只，每12小时一次，共计5天，期间减少投喂食物，正常饮水；S4、观察菌载量；清扫周期开始前后分别收取小鼠粪便，称重后加入1mlPBS缓冲液，充分研磨后静止沉淀10分钟，吸取10μl上清液分别涂布于TSA与YPD培养基上，37℃培养48小时，计数菌载量，菌载量明显下降视为处理合格；S5、念珠菌培育处理；将白念珠菌SC5314于YPD培养基上复苏，取单菌落重选于YPD液体培养基，置于37℃摇床中，200转震荡过夜，离心收集真菌，PBS缓冲液冲洗2次，置于含有10％特级胎牛血清的1640培养基中，再次置于37℃摇床，200转震荡孵育2小时，离心收集真菌，重悬于适量生理盐水中，灌胃小鼠，300μl只；S6、灌胃给药；灌胃念珠菌后，合适时间称取适量环磷酰胺粉末，加无菌生理盐水溶解，腹腔注射方式对实验小鼠单次给药，给药量为60mgKg，环磷酰胺给药后，每间隔1天给与实验小鼠颈部皮下地塞米松注射，给药量为1mgKg；S7、监测状态评估；自小鼠出现精神行为异常后停止给药，正常进食及饮水，持续监测小鼠心率、呼吸、体温、毛发、精神行为状态，直至小鼠死亡，解剖小鼠后进行病理染色，评估小鼠器官念珠菌侵袭程度及器官损伤程度。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 济宁市第一人民医院 一种侵袭性念珠菌感染模型的构建方法