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摘要:提供了单链核酸分子测序文库构建方法,所述方法包括:1使单链核酸分子的3’端与3’端接头相连,以便得到连接产物;2将第一引物、DNA聚合酶、逆转录酶与所述连接产物进行延伸和扩增反应,以便得到3’端和5’端分别连有接头的扩增产物,所述扩增产物构成所述测序文库;其中,所述逆转录酶具有末端转移酶活性。利用所述的测序文库构建方法获得的测序文库同时含有已知序列的3’端接头和5’端接头,接头连接效率高,原始模板损失少、利用率高,反应时间短,成本低,适于广泛应用。
主权项:一种单链核酸分子测序文库构建方法,其特征在于,包括:1使单链核酸分子的3’端与3’端接头相连,以便得到连接产物;2将第一引物、DNA聚合酶、逆转录酶与所述连接产物进行延伸和扩增反应,以便得到3’端和5’端分别连有接头的扩增产物,所述扩增产物构成所述测序文库;其中,所述3’端接头包括:主链,所述主链用于与所述单链核酸分子的3’端相连;辅助链,所述辅助链的3’端含有多个N碱基,所述多个N碱基用于与所述单链核酸分子的3’端杂交;所述辅助链的5’端序列与所述主链的5’端至少部分序列反向互补;所述逆转录酶具有末端转移酶活性,所述延伸反应所得生成链的3’末端具有多个相同碱基序列;所述第一引物包括5’端接头序列和互补序列,所述互补序列与所述生成链的3’末端多个相同碱基序列反向互补。
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