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摘要：本发明公开了在甜瓜毛状根中验证CRISPR或Cas9载体活性及基因功能的方法，使用萌发两天的甜瓜种子的子叶作为外植体，利用发根农杆菌K599进行侵染，经过共培养，毛状根诱导，以绿色荧光蛋白eGFP作为转基因毛状根的筛选标记，可在1个月左右获得转化CRISPRCas9载体的毛状根。利用该转化材料，我们分析了多个基因的基因编辑靶位点的可用性，发现增加sgRNA表达单元拷贝数对于基因编辑效率具有促进作用，并且我们发现CmRHL1被编辑后，甜瓜根毛不能形成。因此，本发明为验证CRISPRCas9载体活性以及研究基因在根发育过程中的功能，提供了一种方便、快捷的途径，对于甜瓜的稳定遗传转化方法是一个有利补充。
主权项：1.在甜瓜毛状根中验证CRISPR或Cas9载体活性及基因功能的方法，其特征在于：包括以下步骤：a.基因编辑载体的构建；b.发根农杆菌工程菌的制备；c.子叶外植体的制备；d.外植体的侵染；e.外植体和农杆菌的共培养；f.毛状根诱导；g.阳性毛状根鉴定及表型观察；h.基因编辑检测。
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百度查询： 河南农业大学 在甜瓜毛状根中验证CRISPR或Cas9载体活性及基因功能的方法
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