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理性改造7β-羟基类固醇脱氢酶辅酶依赖性高效合成熊去氧胆酸 

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摘要:本发明公开了理性改造7β‑羟基类固醇脱氢酶辅酶依赖性高效合成熊去氧胆酸,属于生物催化工程领域。本发明获得了酶活力提高和对辅因子NADH亲和力提高的Hs7β‑HSDH突变体A22TQ23EL45AN46E,其酶活性提高了65.2倍,催化效率提高了44.9倍,以7K‑LCA为底物,以NADH为辅酶,突变体催化合成UDCA的产率可达到77.6%,与野生型酶相比,产量增加了13.9倍。与Bm7α‑HSDH偶联后,仅需添加0.5mMNADH,催化底物CDCA一锅法合成UDCA,突变体的产率达到90.1%,比野生型酶增加了11.5倍。

主权项:1.一种7β-羟基类固醇脱氢酶突变体,其特征在于,所述突变体为,将氨基酸序列如SEQIDNO.1所示的7β-羟基类固醇脱氢酶的第22位的丙氨酸突变为苏氨酸或天冬氨酸得到的;或所述突变体为,将氨基酸序列如SEQIDNO.1所示的7β-羟基类固醇脱氢酶的第23位的谷氨酰胺突变为谷氨酸或丙氨酸得到的;或所述突变体为,将氨基酸序列如SEQIDNO.1所示的7β-羟基类固醇脱氢酶的第22位的丙氨酸突变为苏氨酸或天冬氨酸,同时将第23位的谷氨酰胺突变为谷氨酸或丙氨酸得到的;或所述突变体为,将氨基酸序列如SEQIDNO.1所示的7β-羟基类固醇脱氢酶的第45位的亮氨酸突变为丙氨酸得到的;或所述突变体为,将氨基酸序列如SEQIDNO.1所示的7β-羟基类固醇脱氢酶的第46位的天冬酰胺突变为谷氨酸得到的;或所述突变体为,将氨基酸序列如SEQIDNO.1所示的7β-羟基类固醇脱氢酶的第45位的亮氨酸突变为丙氨酸,同时将第46位的天冬酰胺突变为谷氨酸得到的;或所述突变体为,将氨基酸序列如SEQIDNO.1所示的7β-羟基类固醇脱氢酶的第22位的丙氨酸突变为苏氨酸,第23位的谷氨酰胺突变为谷氨酸,第45位的亮氨酸突变为丙氨酸,同时将第46位的天冬酰胺突变为谷氨酸得到的;或所述突变体为,将氨基酸序列如SEQIDNO.1所示的7β-羟基类固醇脱氢酶的第22位的丙氨酸突变为天冬氨酸,第23位的谷氨酰胺突变为丙氨酸,第45位的亮氨酸突变为丙氨酸,同时将第46位的天冬酰胺突变为谷氨酸得到的。

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