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摘要：本发明涉及一种基于一测多评法同时定量检测体液中5种多酚的方法。所述方法是以白藜芦醇为内参物进行一测多评，建立白藜芦醇与反式白藜芦醇‑3‑O‑β‑D‑葡萄糖醛酸酯、反式白藜芦醇‑3‑硫酸盐、反式白藜芦醇‑4'‑O‑β‑D‑葡萄糖醛酸酯和反式白藜芦醇4'‑硫酸盐的相对校正因子，通过相对校正因子计算体液中5种多酚的含量。本发明通过一测多评法同时测定5个多酚指标成分的含量，只需使用白藜芦醇Trans‑Res一种标准品作为内参物，就可以可通过相对校正因子计算得到反式白藜芦醇‑3‑O‑β‑D‑葡萄糖醛酸酯、反式白藜芦醇‑3‑硫酸盐、反式白藜芦醇‑4'‑O‑β‑D‑葡萄糖醛酸酯和反式白藜芦醇4'‑硫酸盐的具体含量，具有操作简单，灵敏度高，测定准确，适用性强的优点。

主权项：1.一种基于一测多评法同时定量检测体液中5种多酚的方法，其特征在于，所述方法是以白藜芦醇为内参物进行一测多评，建立白藜芦醇与反式白藜芦醇-3-O-β-D-葡萄糖醛酸酯、反式白藜芦醇-3-硫酸盐、反式白藜芦醇-4'-O-β-D-葡萄糖醛酸酯和反式白藜芦醇4'-硫酸盐的相对校正因子，通过相对校正因子计算体液中5种多酚的含量，具体包括以下步骤：（1）单一标准品储备液制备：将反式白藜芦醇-3-O-β-D-葡萄糖醛酸酯、反式白藜芦醇-3-硫酸盐、反式白藜芦醇-4'-O-β-D-葡萄糖醛酸酯、反式白藜芦醇4'-硫酸盐和白藜芦醇标准品分别溶于乙腈中，得到反式白藜芦醇-3-O-β-D-葡萄糖醛酸酯、反式白藜芦醇-3-硫酸盐、反式白藜芦醇-4'-O-β-D-葡萄糖醛酸酯、反式白藜芦醇4'-硫酸盐和白藜芦醇的标准品溶液；（2）混合标准品溶液C制备：将步骤（1）所得5种标准品溶液等体积混合后，加入乙腈进行稀释，得到混合标准品溶液A；继续用乙腈稀释混合标准品溶液A，得到系列浓度的混合标准品溶液B；将大豆黄素溶于乙腈中，得到内标工作液；将系列浓度的混合标准品溶液B和内标工作液加入到空白体液中，得到系列浓度的混合标准品溶液C；（3）供试品溶液制备：将待测体液预处理后，进行微洗脱固相萃取，得到供试品溶液；其中，所述待测体液为血浆时，按照如下方法进行预处理：向血浆中加入EDTA进行沉淀，在4℃、1000g下离心15min，收集上清液，然后以1~3%的体积比向上清液中加入甲酸，于-80℃中保存；所述待测体液为尿液时，按照如下方法进行预处理：以1~3%的体积比向尿液中加入甲酸，再用水稀释5倍，于-80℃中保存；所述微洗脱固相萃取具体方法为：预处理后的待测体液稀释1倍，然后装入Oasis96孔反相亲水性−亲脂性平衡吸附剂μ-SPE板中，用水和0.2%的醋酸清洗淋洗，再用含有0.1%甲酸和8mM乙酸铵的乙腈洗脱3次，进入96深孔收集板，在收集板中加水；（4）高效液相色谱-串联质谱检测：将步骤（2）所得系列浓度的混合标准品溶液C注入高效液相色谱-串联质谱仪进行检测，然后以反式白藜芦醇-3-O-β-D-葡萄糖醛酸酯、反式白藜芦醇-3-硫酸盐、反式白藜芦醇-4'-O-β-D-葡萄糖醛酸酯、反式白藜芦醇4'-硫酸盐和白藜芦醇的质量浓度（X）为横坐标，待测物峰面积内标峰面积（Y）为纵坐标，绘制标准曲线，根据标准曲线分别得到5种物质的含量和对应的峰面积比值；再以白藜芦醇为内参物，计算其他4种待测成分的相对校正因子f，计算公式为f＝fsfk＝（Ck×As）（Cs×Ak）；其中Ck为待测成分含量，Ak为待测成分峰面积，Cs为内参物含量，As为内参物峰面积；其中，所述高效液相色谱的条件如下：色谱柱：XSelectHSST3Column，100Å，5µm，4.6mm×250mm；流动相A为含5mmolL乙酸铵的水，流动相B为含0.1%甲酸的乙腈；梯度洗脱为：0~7min，流动相A，90%→50%，流动相B，10%→50%；7~8min，流动相A，50%，流动相B，50%；8~8.5min，流动相A，50%→90%，流动相B，50%→10%；8.5~12min，流动相A，90%，流动相B，10%；流速：0.35mLmin；柱温：40℃；进样量：5μL；所述串联质谱的质谱源参数如下：监测模式：MRM，离子源：ESI，离子源温度：550℃，离子喷雾电压：-4500V，气帘气：35psi，GS1：55psi，GS2：60psi；所述白藜芦醇与反式白藜芦醇-3-硫酸盐的相对矫正因子为0.3658，白藜芦醇与反式白藜芦醇-4'-O-β-D-葡萄糖醛酸酯的相对矫正因子为2.3568，白藜芦醇与反式白藜芦醇4'-硫酸盐的相对矫正因子为11.4925，白藜芦醇与反式白藜芦醇-3-O-β-D-葡萄糖醛酸酯的相对矫正因子为0.6237；（5）将步骤（3）所得供试品溶液注入高效液相色谱仪，测定体液中白藜芦醇的含量，然后根据白藜芦醇与反式白藜芦醇-3-O-β-D-葡萄糖醛酸酯、反式白藜芦醇-3-硫酸盐、反式白藜芦醇-4'-O-β-D-葡萄糖醛酸酯和反式白藜芦醇4'-硫酸盐的相对校正因子进行计算，分别得到体液中其他4种多酚的含量。

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