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摘要：本发明公开了一种含连翘苷的水牛早期胚胎冷冻及解冻的方法，在冷冻平衡液、冷冻液和解冻液中添加一定含量的连翘苷，可以显著提高水牛胚胎冷冻解冻后的复苏率及孵化率，此外，连翘苷价格适中，易于获取，便于在水牛胚胎冷冻技术的体外生产中得到广泛推广与应用。
主权项：1.一种含连翘苷的水牛早期胚胎冷冻及解冻的方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤S1，冷冻：收集发育到囊胚阶段的水牛早期胚胎，置于生理盐水中备用，先将水牛早期胚胎将放入冷冻基础液中3～7min，再转移到冷冻平衡液中0.5～1.5min，然后再转移入冷冻液中，然后将水牛早期胚胎与冷冻液滴转到Cryotop载体的前端，再将Cryotop载体投入到液氮中；步骤S2，解冻：将冷冻有水牛早期胚胎的Cryotop载体浸入37.5～39.5℃的解冻液中4～6min，再将胚胎转移到37.5～39.5℃的冷冻基础液中4～6min，随后将胚胎转入新的冷冻基础液中，在37.5～39.5℃、3～6％CO2的环境中恢复1～1.5h。所述冷冻基础液为含有4-羟乙基哌嗪乙磺酸、NaHCO3和丙酮酸钠的TCM-199培养液；所述冷冻液为包含连翘苷和溶剂，所述溶剂为含有4-羟乙基哌嗪乙磺酸、NaHCO3、丙酮酸钠、二甲基亚砜、乙二醇、蔗糖、胎牛血清的TCM-199培养液；所述冷冻平衡液包含连翘苷和溶剂，所述溶剂为含有4-羟乙基哌嗪乙磺酸、NaHCO3、丙酮酸钠、二甲基亚砜、乙二醇、胎牛血清的TCM-199培养液；所述解冻液包含连翘苷和溶剂，所述溶剂为含有4-羟乙基哌嗪乙磺酸、NaHCO3、丙酮酸钠、蔗糖、胎牛血清的TCM-199培养液。
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