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摘要:本发明涉及组织培养技术领域,特别是涉及一种以龙牙蕉愈伤组织为受体的遗传转化方法。将龙牙蕉愈伤组织与重悬浮液混合,得到侵染愈伤组织,将侵染愈伤组织接种到共培养培养基上进行共培养,得到共培养愈伤组织,将共培养愈伤组织接种到筛选培养基上进行筛选培养,得到新长出的愈伤组织,将新长出的愈伤组织接种到增殖培养基上进行增殖培养,实现以龙牙蕉愈伤组织为受体的遗传转化。本发明的目的是提供一种以龙牙蕉(基因型为AAB)愈伤组织为受体材料的遗传转化方法,相比于已报道的香蕉遗传转化方法,拓宽了香蕉遗传转化利用范围,本发明的遗传转化效率高(基本上超过30%的阳性率),且重复性好。
主权项:1.一种以龙牙蕉愈伤组织为受体的遗传转化方法,其特征在于,包括以下步骤:1)将龙牙蕉愈伤组织与重悬浮液混合,得到侵染愈伤组织;所述龙牙蕉的品种为香粉1号;所述重悬浮液中含有带有目的基因的过表达载体的根癌农杆菌;2)将所述步骤1)得到的侵染愈伤组织接种到共培养培养基上进行共培养,得到共培养愈伤组织;所述共培养培养基为:NB培养基+6-BA0.1mgL+谷氨酰胺200gL+活性炭0.2gL+蔗糖30gL+卡拉胶9gL+乙酰丁香酮100~120µmolL,pH值为5.8;3)将所述步骤2)得到的共培养愈伤组织接种到筛选培养基上进行筛选培养,得到新长出的愈伤组织;所述筛选培养基为:NB培养基+6-BA0.1mgL+谷氨酰胺200gL+活性炭0.2gL+蔗糖30gL+卡拉胶9gL+潮霉素10~25mgL+特美汀100~150mgL,pH值为5.8;4)将所述步骤3)得到的新长出的愈伤组织接种到增殖培养基上进行增殖培养,实现以龙牙蕉愈伤组织为受体的遗传转化;所述增殖培养基为:NB培养基+6-BA0.1mgL+谷氨酰胺200gL+活性炭0.2gL+蔗糖30gL+卡拉胶9gL,pH值为5.8。
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