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摘要:本发明公开了一种具有屏障结构的类器官模型及其构建方法,所述方法包括:获得具有屏障结构的类器官芯片,包括:细胞培养板;设于所述细胞培养板内的集成式微孔组件,从上到下依次包括:上层元件、多孔膜和下层元件;所述上层元件包括第一和第二中空件,所述第一中空件被所述第二中空件分隔成左右两个培养基储液池,所述第二中空件底部设有所述多孔膜形成培养基加液池;所述下层元件呈中空形,所述左右两个培养基储液池的底部通过所述下层元件形成培养基灌流通道。将多种屏障细胞依次接种在所述多孔膜的上下侧,将类器官加载至培养基加液池中,将所述芯片放置于翘板摇床上长期动态培养。简化了流体实施条件,提高了具有屏障结构的类器官模型的仿生性与保真度。
主权项:1.一种具有屏障结构的类器官模型的构建方法,其特征在于,所述方法包括:获得具有屏障结构的类器官芯片,包括:细胞培养板和设于所述细胞培养板内的集成式微孔组件,所述集成式微孔组件从上到下依次包括:上层元件、多孔膜和下层元件;所述上层元件包括第一中空件和第二中空件,所述第一中空件的其中一对相对设置的侧壁均抵接于所述细胞培养板的内壁,所述第一中空件的中部卡接有所述第二中空件,所述第二中空件将所述第一中空件分隔成左培养基储液池和右培养基储液池,所述第二中空件的底部设有所述多孔膜形成培养基加液池;所述下层元件呈中空形且所述下层元件外形与所述第一中空件的外周形状相适配,所述下层元件的中部上表面用于支撑所述多孔膜,所述左培养基储液池的底部和所述右培养基储液池的底部通过所述下层元件的底部相连通形成培养基灌流通道;所述第一中空件的高度为2~15mm;所述下层元件的高度为0.5~3mm;所述多孔膜的厚度为5~20μm,孔隙大小为0.1~3μm,孔隙率为1×105~5×106孔cm2;将所述具有屏障结构的类器官芯片灭菌后,对所述多孔膜进行包被处理;将内皮细胞培养基与用于增强屏障结构的细胞的培养基按照1:9-4:6的体积比配制,获得条件培养基;将内皮细胞接种在所述包被后的多孔膜的一侧,用于增强屏障结构的细胞接种至所述包被后的多孔膜的另一侧,使用所述条件培养基将内皮细胞和用于增强屏障结构的细胞共培养;所述共培养12~72h后,将类器官加载至所述芯片的培养基加液池中,分别向所述培养基储液池和所述培养基加液池中添加所述条件培养基与类器官成熟的培养基,后置于精密翘板摇床上进行功能化屏障结构与类器官的长期动态共培养,获得具有屏障结构的类器官模型;其中,所述用于增强屏障结构的细胞包括周细胞、星形胶质细胞、脉络从上皮细胞、神经元细胞中的一种;向所述培养基加液池中添加的类器官的类型包括大脑类器官、胎盘类器官、肿瘤类器官、睾丸类器官中的一种。
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百度查询: 武汉大学 一种具有屏障结构的类器官模型及其构建方法
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