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摘要：本发明提供了一种负载艾片的PD‑L1细胞纳米囊泡药物及其制备和应用。本发明构建稳定表达PD‑L1基因的HEK293T转染细胞株，以此制备PD‑L1细胞纳米囊泡，再负载低剂量的艾片并制备成水凝胶。本发明工艺简单，目的蛋白表达高效稳定，制备的纳米药物具有生物相容性良好、毒性低、药物利用率高等优点；比单独使用药效更显著；将纳米药物嵌入温敏水凝胶，便于应用且纳米药物可持续且稳定地释放。体外实验显示其可以抑制免疫细胞增殖和促进皮肤细胞迁移，烫伤模型则证实了PD‑L1蛋白和艾片的纳米药物具有协同抗炎、促进整体药物吸收的作用，加速了伤口的愈合。本发明为皮肤创伤等疾病的有效治疗开拓了一种新的途径。

主权项：1.一种负载艾片的PD-L1细胞纳米囊泡药物在制备烫伤皮肤治疗药物中的应用，其特征在于，所述负载艾片的PD-L1细胞纳米囊泡药物包含PD-L1细胞纳米囊泡，所述PD-L1细胞纳米囊泡上负载艾片；所述负载艾片的PD-L1细胞纳米囊泡药物由10:10重量比的PD-L1细胞纳米囊泡和艾片制成；所述负载艾片的PD-L1细胞纳米囊泡药物通过以下方法制备：取1mgml的PD-L1细胞纳米囊泡与1mgml的艾片溶液混合，使用MicroPulser电穿孔仪在300V、150μF的参数下使艾片负载到细胞纳米囊泡的中，冰上孵育30min后，以13500rpm，4℃，离心10min去除未负载的艾片，PBS重悬即得负载艾片的PD-L1细胞纳米囊泡药物溶液；所述PD-L1细胞纳米囊泡的制备方法包括：使用PEI转染试剂、鼠人CD274基因慢病毒cDNA表达质粒和包装质粒制备重组慢病毒载体，感染目的细胞以构建稳定过表达PD-L1基因的转染细胞株；培养扩增后使用HM裂解液裂解细胞，用组织研磨器充分研磨破碎细胞，5000rpm，4℃离心10min去除细胞核和其他杂质；12000rpm，4℃，离心10min获得细胞膜沉淀；再通过0.45μm、0.22μm和0.11μm孔径的滤膜过滤压缩成囊泡状的细胞膜结构，即得PD-L1细胞纳米囊泡；使用Bradford蛋白定量试剂测定蛋白量并调整浓度为1mgml的PD-L1细胞纳米囊泡；所述1mgmL的艾片溶液的制备方法包括：将所述艾片研磨成粉末，称量10mg艾片，溶解于10μLDMSO中，分次加入1mLPBS，将离心管超声5分钟帮助溶解，至总体积为10mL，得1mgmL的艾片溶液；所述治疗烫伤皮肤创伤的药物中还含有PluronicF-127温敏型水凝胶。

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