买专利卖专利找龙图腾，真高效！ 查专利查商标用IPTOP,全免费！专利年费监控用IP管家,真方便！

摘要：本发明提供一种多靶点酶促自组装荧光激活型纳米探针的制备方法及应用，属于药学领域。该方法采用Fmoc固相肽合成策略，创新性的合成N端连接荧光猝灭剂Dabcyl，C端标记荧光素，近C端为可由碱性磷酸酶脱磷酸化发生自组装行为的自组装序列YpYYG，中段为可由组织蛋白酶B切割成为荧光“开关”的切割序列KGGGFLGK，近N端为可与泡沫细胞表面p32受体高度结合的靶向序列CGNKRTRGC或LyP‑1的功能多肽F‑pY‑LyP‑1。该荧光激活型纳米探针在多靶点的协同作用下精准到达斑块部位，并自组装成球状纳米颗粒，增加探针在斑块内聚集和滞留效果，降低非特异性信号干扰，更准确地识别动脉粥样硬化早期斑块。

主权项：1.一种多靶点酶促自组装荧光激活型纳米探针的制备方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：1将0.5～2g二氯树脂加入1～15mL二氯甲烷溶胀10～60min，接着，依次向溶液中加入0.1～100mg第一位赖氨酸Fmoc-LysFAM-OH和0.1～100mgN,N-二异丙基乙胺，并在20～40℃下反应1～4h，得到Fmoc-LysFAM-树脂；2将0.5～2g步骤1制备的Fmoc-LysFAM-树脂浸泡到5～50mL哌啶和N,N-二甲基甲酰胺DMF的混合溶液中，并在20～40℃下反应10～50min，以脱去Fmoc保护，得到H2N-LysFAM-树脂；3将制备的0.5～2gH2N-LysFAM-树脂、0.1～100mg第二位甘氨酸Fmoc-Gly-OH、0.1～50mg缩合剂苯并三氮唑-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯和0.1～100mgN,N-二异丙基乙胺依次溶解到1～20mLN,N-二甲基甲酰胺中，并在20～40℃下反应1～4h，得到Fmoc-Gly-LysFAM-树脂；4按照步骤2用的哌啶和N,N-二甲基甲酰胺的混合溶液脱去步骤3制备的Fmoc-Gly-LysFAM-树脂中的Fmoc保护，得到H2N-Gly-LysFAM-树脂；5用“H2N-Gly-LysFAM-树脂和Fmoc-Tyr-OH”分别替代步骤3中的“H2N-LysFAM-树脂和第二位甘氨酸Fmoc-Gly-OH”，其他步骤均保持与步骤3和步骤4一致，得到H2N-Tyr-Gly-LysFAM-树脂；然后用“H2N-Tyr-Gly-LysFAM-树脂和Fmoc-PO3BzlTyr-OH”分别替代步骤3中的“H2N-LysFAM-树脂和第二位甘氨酸Fmoc-Gly-OH”，其他步骤均保持与步骤3和步骤4一致，得到H2N-PO3BzlTyr-Tyr-Gly-LysFAM-树脂；然后用“H2N-PO3BzlTyr-Tyr-Gly-LysFAM-树脂和Fmoc-Tyr-OH”分别替代步骤3中的“H2N-LysFAM-树脂和第二位甘氨酸Fmoc-Gly-OH”，其他步骤均保持与步骤3和步骤4一致，得到H2N-Tyr-PO3BzlTyr-Tyr-Gly-LysFAM-树脂；然后用“H2N-Tyr-PO3BzlTyr-Tyr-Gly-LysFAM-树脂和Fmoc-Lys-OH”分别替代步骤3中的“H2N-LysFAM-树脂和第二位甘氨酸Fmoc-Gly-OH”，其他步骤均保持与步骤3和步骤4一致，得到H2N-Lys-Tyr-PO3BzlTyr-Tyr-Gly-LysFAM-树脂；然后用“H2N-Lys-Tyr-PO3BzlTyr-Tyr-Gly-LysFAM-树脂”替代步骤3中的“H2N-LysFAM-树脂”，其他步骤均保持与步骤3和步骤4一致，得到H2N-Gly-Lys-Tyr-PO3BzlTyr-Tyr-Gly-LysFAM-树脂；然后用“H2N-Gly-Lys-Tyr-PO3BzlTyr-Tyr-Gly-LysFAM-树脂和Fmoc-Leu-OH”分别替代步骤3中的“H2N-LysFAM-树脂和第二位甘氨酸Fmoc-Gly-OH”，其他步骤均保持与步骤3和步骤4一致，得到H2N-Leu-Gly-Lys-Tyr-PO3BzlTyr-Tyr-Gly-LysFAM-树脂；然后用“H2N-Leu-Gly-Lys-Tyr-PO3BzlTyr-Tyr-Gly-LysFAM-树脂和Fmoc-Phe-OH”分别替代步骤3中的“H2N-LysFAM-树脂和第二位甘氨酸Fmoc-Gly-OH”，其他步骤均保持与步骤3和步骤4一致，得到H2N-Phe-Leu-Gly-Lys-Tyr-PO3BzlTyr-Tyr-Gly-LysFAM-树脂；然后用“H2N-Phe-Leu-Gly-Lys-Tyr-PO3BzlTyr-Tyr-Gly-LysFAM-树脂”替代步骤3中的“H2N-LysFAM-树脂”，其他步骤均保持与步骤3和步骤4一致，得到H2N-Gly-Phe-Leu-Gly-Lys-Tyr-PO3BzlTyr-Tyr-Gly-LysFAM-树脂；然后用“H2N-Gly-Phe-Leu-Gly-Lys-Tyr-PO3BzlTyr-Tyr-Gly-LysFAM-树脂”替代步骤3中的“H2N-LysFAM-树脂”，其他步骤均保持与步骤3和步骤4一致，得到H2N-Gly-Gly-Phe-Leu-Gly-Lys-Tyr-PO3BzlTyr-Tyr-Gly-LysFAM-树脂；然后用“H2N-Gly-Gly-Phe-Leu-Gly-Lys-Tyr-PO3BzlTyr-Tyr-Gly-LysFAM-树脂”替代步骤3中的“H2N-LysFAM-树脂”，其他步骤均保持与步骤3和步骤4一致，得到H2N-Gly-Gly-Gly-Phe-Leu-Gly-Lys-Tyr-PO3BzlTyr-Tyr-Gly-LysFAM-树脂；然后用“H2N-Gly-Gly-Gly-Phe-Leu-Gly-Lys-Tyr-PO3BzlTyr-Tyr-Gly-LysFAM-树脂和Fmoc-Lys-OH”分别替代步骤3中的“H2N-LysFAM-树脂和第二位甘氨酸Fmoc-Gly-OH”，其他步骤均保持与步骤3和步骤4一致，得到H2N-Lys-Gly-Gly-Gly-Phe-Leu-Gly-Lys-Tyr-PO3BzlTyr-Tyr-Gly-LysFAM-树脂；然后用“H2N-Lys-Gly-Gly-Gly-Phe-Leu-Gly-Lys-Tyr-PO3BzlTyr-Tyr-Gly-LysFAM-树脂和Fmoc-Cys-OH”分别替代步骤3中的“H2N-LysFAM-树脂和第二位甘氨酸Fmoc-Gly-OH”，其他步骤均保持与步骤3和步骤4一致，得到H2N-Cys-Lys-Gly-Gly-Gly-Phe-Leu-Gly-Lys-Tyr-PO3BzlTyr-Tyr-Gly-LysFAM-树脂；然后用“H2N-Cys-Lys-Gly-Gly-Gly-Phe-Leu-Gly-Lys-Tyr-PO3BzlTyr-Tyr-Gly-LysFAM-树脂”替代步骤3中的“H2N-LysFAM-树脂”，其他步骤均保持与步骤3和步骤4一致，得到H2N-Gly-Cys-Lys-Gly-Gly-Gly-Phe-Leu-Gly-Lys-Tyr-PO3BzlTyr-Tyr-Gly-LysFAM-树脂；然后用“H2N-Gly-Cys-Lys-Gly-Gly-Gly-Phe-Leu-Gly-Lys-Tyr-PO3BzlTyr-Tyr-Gly-LysFAM-树脂和Fmoc-Arg-OH”分别替代步骤3中的“H2N-LysFAM-树脂和第二位甘氨酸Fmoc-Gly-OH”，其他步骤均保持与步骤3和步骤4一致，得到H2N-Arg-Gly-Cys-Lys-Gly-Gly-Gly-Phe-Leu-Gly-Lys-Tyr-PO3BzlTyr-Tyr-Gly-LysFAM-树脂；然后用“H2N-Arg-Gly-Cys-Lys-Gly-Gly-Gly-Phe-Leu-Gly-Lys-Tyr-PO3BzlTyr-Tyr-Gly-LysFAM-树脂和Fmoc-Thr-OH”分别替代步骤3中的“H2N-LysFAM-树脂和第二位甘氨酸Fmoc-Gly-OH”，其他步骤均保持与步骤3和步骤4一致，得到H2N-Thr-Arg-Gly-Cys-Lys-Gly-Gly-Gly-Phe-Leu-Gly-Lys-Tyr-PO3BzlTyr-Tyr-Gly-LysFAM-树脂；然后用“H2N-Thr-Arg-Gly-Cys-Lys-Gly-Gly-Gly-Phe-Leu-Gly-Lys-Tyr-PO3BzlTyr-Tyr-Gly-LysFAM-树脂和Fmoc-Arg-OH”分别替代步骤3中的“H2N-LysFAM-树脂和第二位甘氨酸Fmoc-Gly-OH”，其他步骤均保持与步骤3和步骤4一致，得到H2N-Arg-Thr-Arg-Gly-Cys-Lys-Gly-Gly-Gly-Phe-Leu-Gly-Lys-Tyr-PO3BzlTyr-Tyr-Gly-LysFAM-树脂；然后用“H2N-Arg-Thr-Arg-Gly-Cys-Lys-Gly-Gly-Gly-Phe-Leu-Gly-Lys-Tyr-PO3BzlTyr-Tyr-Gly-LysFAM-树脂和Fmoc-Lys-OH”分别替代步骤3中的“H2N-LysFAM-树脂和第二位甘氨酸Fmoc-Gly-OH”，其他步骤均保持与步骤3和步骤4一致，得到H2N-Lys-Arg-Thr-Arg-Gly-Cys-Lys-Gly-Gly-Gly-Phe-Leu-Gly-Lys-Tyr-PO3BzlTyr-Tyr-Gly-LysFAM-树脂；然后用“H2N-Lys-Arg-Thr-Arg-Gly-Cys-Lys-Gly-Gly-Gly-Phe-Leu-Gly-Lys-Tyr-PO3BzlTyr-Tyr-Gly-LysFAM-树脂和Fmoc-Asn-OH”分别替代步骤3中的“H2N-LysFAM-树脂和第二位甘氨酸Fmoc-Gly-OH”，其他步骤均保持与步骤3和步骤4一致，得到H2N-Asn-Lys-Arg-Thr-Arg-Gly-Cys-Lys-Gly-Gly-Gly-Phe-Leu-Gly-Lys-Tyr-PO3BzlTyr-Tyr-Gly-LysFAM-树脂；然后用“H2N-Asn-Lys-Arg-Thr-Arg-Gly-Cys-Lys-Gly-Gly-Gly-Phe-Leu-Gly-Lys-Tyr-PO3BzlTyr-Tyr-Gly-LysFAM-树脂”替代步骤3中的“H2N-LysFAM-树脂”，其他步骤均保持与步骤3和步骤4一致，得到H2N-Gly-Asn-Lys-Arg-Thr-Arg-Gly-Cys-Lys-Gly-Gly-Gly-Phe-Leu-Gly-Lys-Tyr-PO3BzlTyr-Tyr-Gly-LysFAM-树脂；然后用“H2N-Gly-Asn-Lys-Arg-Thr-Arg-Gly-Cys-Lys-Gly-Gly-Gly-Phe-Leu-Gly-Lys-Tyr-PO3BzlTyr-Tyr-Gly-LysFAM-树脂和Fmoc-Cys-OH”分别替代步骤3中的“H2N-LysFAM-树脂和第二位甘氨酸Fmoc-Gly-OH”，其他步骤均保持与步骤3和步骤4一致，得到H2N-Cys-Gly-Asn-Lys-Arg-Thr-Arg-Gly-Cys-Lys-Gly-Gly-Gly-Phe-Leu-Gly-Lys-Tyr-PO3BzlTyr-Tyr-Gly-LysFAM-树脂；6将0.1～2g步骤5制备的H2N-Cys-Gly-Asn-Lys-Arg-Thr-Arg-Gly-Cys-Lys-Gly-Gly-Gly-Phe-Leu-Gly-Lys-Tyr-PO3BzlTyr-Tyr-Gly-LysFAM-树脂加入由三氟乙酸、水和三异丙基硅烷组成的切割液中，并在20～40℃下反应1～4h；用5～40mL乙醚将产物沉淀后，于20～40℃干燥得到Dabcyl-Cys-Gly-Asn-Lys-Arg-Thr-Arg-Gly-Cys-Lys-Gly-Gly-Gly-Phe-Leu-Gly-Lys-Tyr-PO3BzlTyr-Tyr-Gly-LysFAM粗品；最后，用高效液相色谱纯化粗品制备出纯品多肽Dabcyl-Cys-Gly-Asn-Lys-Arg-Thr-Arg-Gly-Cys-Lys-Gly-Gly-Gly-Phe-Leu-Gly-Lys-Tyr-PO3BzlTyr-Tyr-Gly-LysFAM，缩写为多肽F-pY-LyP-1。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 徐州医科大学 一种多靶点酶促自组装荧光激活型纳米探针的制备方法及应用