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一种发根农杆菌介导的玫瑰毛状根遗传转化方法 

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摘要:本发明涉及植物基因工程技术领域,具体涉及一种发根农杆菌介导的玫瑰毛状根遗传转化方法;所述方法具体步骤为S1.利用液氮冻融法将载体转入发根农杆菌感受态细胞中,S2.菌液培养,S3.剪取合适紫枝玫瑰嫩茎待用,S4.选取S3中的玫瑰茎段培养转基因转化苗;本发明利用发根农农杆菌介导玫瑰茎段快速遗传转化的方法,由于玫瑰主要以扦插繁殖,所以其材料获取便捷,不用经过叶片诱导愈伤组织、分化体胚细胞、再分化生芽生根等一系列繁琐耗时步骤,可在短时间内大批量的获得转基因材料,实现在非无菌条件下的高效基因转化,是一种高效便捷的玫瑰遗传转化方法,同时也为玫瑰基因功能验证及进一步开展遗传转化体系优化提供参考。

主权项:1.一种发根农杆菌介导的玫瑰毛状根遗传转化方法,其特征在于,具体步骤为:S1.利用液氮冻融法,将35S::GFP载体转入发根农杆菌感受态细胞中,得到菌液;S2.取菌液在固体TY培养基上划线,恒温培养得到单菌落;挑取单菌落于液体TY培养基中,摇床培养活化20~25h;吸取摇床培养活化后的菌液涂布于固体TY培养基上,恒温培养;吸取摇床培养活化后的菌液接种于液体TY培养基中,摇床培养过夜,当菌液浓度OD600=1.0时,停止培养得到发根农杆菌菌液;S3.剪取紫枝玫瑰一年生嫩茎待用;S4.选取S3中剪取的玫瑰茎段,去除茎段多余叶片后将低端切口处在含有菌体的固体TY培养基上蘸取菌体,随后将茎段插入蛭石中,并从茎段顶端往下注入菌液进行培养,即可获得转基因转化苗。

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权利要求:

百度查询: 扬州大学 一种发根农杆菌介导的玫瑰毛状根遗传转化方法

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