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摘要：本发明涉及一种高保真核酸扩增引物设计方法及应用，包括以下步骤：S1、在引物上修饰光响应基团以及3'末端阻断基团形成光控引物，其可沉默聚合酶引导的引物延伸反应；S2、使用特定波长的光源照射光控引物使光响应基团脱离，再通过去磷酸过程产生3'‑OH基团，使得光控引物恢复延伸功能，从而启动核酸扩增。S3、将设计的高保真核酸扩增引物与常规核酸扩增技术结合用于构建检测方法。通过本发明中光控及去磷酸化的双重激活方式，可有效解决反应组分在预混过程中引起的预扩增问题。上述高保真引物设计方法能够在时间和空间上实现核酸扩增反应的精准、快速调控；同时所使用的引物延伸调控方法通用性强，适用于所有的核酸扩增反应，无需根据不同的扩增反应进行调整。
主权项：1.一种高保真核酸扩增引物设计方法及应用，其特征在于，包括以下步骤：S1、在引物上修饰光响应基团以及3'末端阻断基团形成光控引物，其可沉默聚合酶引导的引物延伸反应；S2、使用特定波长的光源照射光控引物使光响应基团脱离，再通过去磷酸过程产生3'-OH基团，使得光控引物恢复延伸功能，从而启动核酸扩增；S3、将设计的高保真核酸扩增引物与常规核酸扩增技术结合用于构建检测方法。所述光控引物是至少具有光响应基团以及3'末端阻断基团两种修饰的核苷酸序列，其使得引物延伸功能暂时沉默。所述光响应基团具有光照断键特性，其在经特定波长的光源照射后断键，光响应基团脱离引物，产生3'-末端磷酸基团。随后，经过去磷酸过程去除3'-末端的磷酸基团，产生3'-OH基团，恢复引物的延伸功能，从而启动核酸扩增。
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百度查询： 重庆医科大学 一种高保真核酸扩增引物设计方法及应用
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