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一种康土抑草菌及其应用 

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摘要:本发明涉及微生物或酶技术领域,具体公开了一种康土抑草菌及其应用。一种康土抑草菌,为卡氏酸链霉菌(Streptomycesacidiscabies),保藏编号为CCTCCM20231081。本发明还提供了康土抑草菌在除草剂中的应用。与现有技术相比,本发明制备的康土抑草菌具有除草活性、适应性强、稳定性好、不易老化等优点,其所制备的生物型绿色除草剂能够防治农业草害,改良土壤,符合可持续绿色发展的要求。

主权项:1.一种除草剂的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:X1将康土抑草菌斜面菌株接入灭菌的种子培养基进行培养,其中康土抑草菌为卡氏酸链霉菌(Streptomycesacidiscabies),保藏编号为CCTCCM20231081;X2将步骤X1中培养的种子液接种至一级种子灌灭菌培养基中继续培养;X3将步骤X2中制得的种子液接种至二级发酵灌灭菌培养基中继续培养;X4经过上述条件培养发酵72h后,每隔24h向发酵液流加发酵液总重量5%的灭菌营养液,继续培养144h,得到抑草菌发酵母液;X5向步骤X4中的母液加入总重量25~35%的泥胡菜乙酸乙酯提取物、0.1~1%的酪蛋白胨、0.05~0.2%的琼脂,再按15~25UmL母液的添加量加入纤维素酶,5~15UmL母液的添加量加入半纤维素酶、果胶酶和蛋白酶,20~60rpm下进行螯合,反应16~30h,得到复合混合母液;X6向步骤X5中的混合母液中加入总重量30%的地衣芽孢杆菌和解淀粉芽孢杆菌混合发酵液,得到混合母液,其中地衣芽孢杆菌(Bacilluslicheniformis),保藏编号为CGMCC1.10314,解淀粉芽孢杆菌(Bacillusamyloliquefaciens),保藏编号为CGMCC1.857;地衣芽孢杆菌和解淀粉芽孢杆菌混合发酵液是将地衣芽孢杆菌和解淀粉芽孢杆菌斜面菌株分别划线LB活化平板培养基中,32℃活化培养20h,挑取活化培养基上的菌种分别转接三角瓶LB液体培养基于摇床200rpm,30℃培养16h,将两种液体菌种等体积混接发酵培养基所得到的;X7向步骤X6中的混合母液中加入总重量3%的改性腰果酚聚醚,混合均匀即得除草剂;所述改性腰果酚聚醚的制备方法包括如下步骤:Y1称取腰果酚聚氧乙烯醚1~3重量份,加热至40~50℃后加入2,2,6,6-四甲基哌啶氧化物0.1~0.3重量份,再加入0.15molL亚磷酸钠水溶液1~3重量份、0.2molL次氯酸钠水溶液1~3重量份,在40~50℃下搅拌16~26h后冷却至室温,滴加饱和亚硫酸钠溶液至溶液pH=6~7,加入二氯甲烷萃取分液,再用酸洗、水洗,有机相减压浓缩后用三氟乙酸的二氯甲烷溶液(体积比=1:1)搅拌1~2h,减压浓缩得到残余物;Y2将步骤Y1中的残余物加入到10~20重量份的二氯甲烷中,再加入2~4重量份的四乙烯五胺,加热至100~120℃下搅拌4~6h,反应结束后降温,减压蒸发除去溶剂,将残余物取1~2重量份、KOH取0.2~0.5重量份,混合后密闭抽真空至-0.1MPa后加热至90~130℃,然后加入6~12重量份环氧丙烷,保持压力<0.4MPa,直至压力减少降至负压后停止反应,将生成的残余物取1~2重量份后、KOH取0.2~0.5重量份重复上述步骤,然后加入2~4重量份的环氧乙烷,保持压力<0.3MPa,温度为100~120℃,反应结束后烘干得到改性腰果酚聚醚。

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