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摘要：本发明公开了一种大肠杆菌整合表达体系及其在酶高效表达中的应用。本发明从3个方面系统地优化了大肠杆菌的整合表达系统。首先，从大肠杆菌基因组ORI区域的18个位点中筛选出表达活性最高的整合位点slmA；其次，鉴定了大肠杆菌中的16个内源启动子并将其与T7启动子相结合构建多启动子；随后，在底盘细胞水平上优化了T7RNA聚合酶的表达。得到的组成型高效整合表达体系与质粒型重组表达方式相比，GFP表达量提升至2倍左右。最后，将其应用于腈水解酶和透明质酸酶的整合表达，实现了稳定高效的酶表达，酶活与质粒水平相当。总之，本发明提供了一种稳定高效的基因表达方法，无需抗生素和诱导剂，使其成为合成生物学、酶工程和相关应用的有力工具。
主权项：1.一种整合表达目的基因的重组大肠杆菌，其特征在于，所述重组大肠杆菌包括以下改造：在大肠杆菌宿主基因组的slmA位点整合目的基因表达框，并将基因组上T7RNA聚合酶编码基因的调控原件进行替换；所述目的基因表达框中含有目的基因以及启动所述目的基因表达的第一启动子，所述第一启动子为串联启动子，所述串联启动子通过Plpp启动子、PgapA启动子、PssrA启动子中的一种或几种与T7启动子串联得到，所述调控原件包括位于T7RNA聚合酶编码基因上游的乳糖操纵子，将所述调控原件替换为含有第二启动子的原件，所述第二启动子选自PalsR启动子或PasnB启动子。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 江南大学 一种大肠杆菌整合表达体系及其在酶高效表达中的应用
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