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生产P34HB的菌株及其构建方法和应用 

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摘要:本发明提供了一种生产P34HB的菌株及其构建方法和应用,所述构建方法包括如下步骤:S1:体外构建含基因A、基因B、ogdA基因和orfz基因核苷酸序列的重组载体;S2:将S1所述重组载体导入菌株中。本发明以盐单胞菌为底盘菌,通过对从葡萄糖到4‑羟基丁酰基辅酶A的途径的基因进行改造,在琥珀酸半醛和4‑羟基丁酸脱氢酶的特定位点进行突变,提升了菌株对P34HB的生产效率,同时提高P34HB中4HB的含量,具有潜在的产业化潜力。

主权项:1.一种生产聚(3-羟基丁酸酯-co-4-羟基丁酸酯)的菌株的构建方法,其特征在于,包括如下步骤:S1:体外构建含基因A、基因B、ogdA基因和orfz基因核苷酸序列的重组载体;S2:将S1所述重组载体导入菌株中;其中,基因A为4hbd基因或4hbd突变体,所述4hbd突变体与4hbd基因的区别在于以下任意一项:(i)第77个碱基由G替换为A,第188个碱基由C替换为G;(ii)第739个碱基由G替换为A;(iii)第574个碱基由G替换为C;(iiii)第757个碱基由C替换为A;(iiiii)第660个碱基由G替换为T;基因B为sucD基因或sucD突变体,所述sucD突变体与sucD基因的区别在于以下任意一项:(1)第56个碱基由0A替换为C;(2)第270个碱基由A替换为T;(3)第287个碱基由T替换为C;(4)第543个碱基由A替换为C;(5)第62个碱基由T替换为G,第1223个碱基由C替换为A;(6)第755个碱基由C替换为T;所述sucD基因的核苷酸序列如SEQIDNO.23所示,所述4hbd基因的核苷酸序列如SEQIDNO.19所示。

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