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一种生产β-紫罗兰酮的酿酒酵母工程菌及其应用 

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摘要:本发明公开了一种生产β‑紫罗兰酮的酿酒酵母工程菌及其应用,属于代谢工程技术领域。本发明所述重组酿酒酵母在酿酒酵母宿主菌中,强化内源甲羟戊酸途径中tHMG1、IDI1、ERG20,优化前体β‑胡萝卜素合成模块中关键基因CrtE、CrtI和CrtYB的拷贝数,弱化角鲨烯合成途径,过表达ADH2基因,POS5基因,敲除FLD1,最后利用脂滴锚定蛋白和质膜锚定标签融合表达类胡萝卜素裂解双加氧酶PhCCD1N174A。利用本发明提供的酿酒酵母生产β‑紫罗兰酮的工艺操作简单、培养基生产成本低廉,β‑紫罗兰酮的5‑L发酵罐产量达578.48mgL,并且产率达到4.19mgLh。

主权项:1.一种酵母工程菌,其特征在于,以酿酒酵母作为出发菌株,敲除所述出发菌株中GAL1710基因簇和GPP1编码基因,过表达有乙酰辅酶供应相关基因、GGPP供应相关基因、β-胡萝卜素生物合成相关基因以及β-紫罗兰酮生物合成亚细胞定位相关基因;所述乙酰辅酶供应相关基因包括乙醇脱氢酶ADH2编码基因、磷酸转酮酶PK编码基因和磷酸转乙酰酶PTA编码基因;所述GGPP供应相关基因包括3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶tHMG1编码基因、异戊二烯焦磷酸异构酶IDI1编码基因和法尼烯基焦磷酸合酶ERG20编码基因;所述β-胡萝卜素生物合成相关基因包括香叶基香叶基二磷酸合成酶CrtE编码基因、八氢番茄红素去饱和酶CrtI编码基因的八氢番茄红素合成酶和番茄红素环化酶CrtYB编码基因;所述β-紫罗兰酮生物合成亚细胞定位相关基因包括PLN1-PhCCD1N174A融合蛋白,所述PLN1-PhCCD1N174A融合蛋白由PhCCD1N174A和脂滴锚定蛋白PLN1组成,所述PhCCD1N174A为类胡萝卜素裂解双加氧酶第174位的天冬氨酸突变为丙氨酸的突变体。

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