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摘要：本发明公开了基于小鼠经口喉镜下注射人工海水导致肺损伤的检测方法，主要涉及小鼠肺损伤检测领域。包括下述步骤：S1，选择满足操作条件的小鼠，并通过经口喉镜下注射人工海水的方式将人工海水注入到小鼠的肺部，使人工海水对小鼠的肺部造成损伤；S2，对小鼠肺部组织进行解剖，并将取材后肺组织立即用微量精密天平称取肺湿重，肺湿重体重即为肺系数；S3，进行小鼠肺泡灌洗液进行取材并进行检测，包括下述步骤：S4，对S2步骤中的小鼠肺组织进行染色及检测，包括下述步骤。本发明的有益效果在于：确保经口腔喉镜进行人工海水注射的方式用于构建肺损伤模型满足惯例需要，最终确保构建的肺损伤模型满足后续研究需求。

主权项：1.基于小鼠经口喉镜下注射人工海水导致肺损伤的检测方法，其特征在于：包括下述步骤：S1，选择满足操作条件的小鼠，并通过经口喉镜下注射人工海水的方式将人工海水注入到小鼠的肺部，使人工海水对小鼠的肺部造成损伤；S2，对小鼠肺部组织进行解剖，并将取材后肺组织立即用微量精密天平称取肺湿重，肺湿重体重即为肺系数；S3，进行小鼠肺泡灌洗液进行取材并进行检测，包括下述步骤：S31，小鼠异氟烷过度麻醉致死，经颈部气管切开，进行气管插管并固定，用1ml注射器抽取0.9ml冰PBS连接气管插管进行灌洗，每次反复抽吸3次，吸出的肺泡灌洗液放入2ml离心管中置于冰上，再次用0.9ml冰PBS进行灌洗1次，重复以上动作；S32，小鼠肺泡灌洗液800g离心10min，取上清液氮速冻后-80℃保存，离心沉淀加入PBS重悬，取10ul细胞悬液加10ulAOPI混合后加入计数板用细胞计数仪进行计数；S33，对小鼠肺泡灌洗液中的细胞染色，取10ul小鼠肺泡灌洗液细胞悬液加300ulPBS稀释后混匀进行1500rpm离心3min甩片，每张片子用100ul，每份样本3张玻片，用免疫组化笔画圈标记，每个玻片加80ul多聚甲醛液进行固定30min，然后PBS清洗3次，每次5min；加吉姆萨染色A液80ul进行染色1min，然后加B液160ul染色10min，流水冲洗干净后中性树胶封片；S34，对肺泡灌洗液蛋白浓度进行检测后，通过ELISA法测肺泡灌洗液中TNFα浓度，并得到检测具体数值；S4，对S2步骤中的小鼠肺组织进行染色及检测，包括下述步骤：S41，对小鼠肺组织进行HE染色，观察小鼠肺损伤情况并记录肺损伤评分；S42，对小鼠肺组织进行肺组织切片免疫荧光染色，制备得到免疫荧光染色后的小鼠肺组织切片，并对小鼠肺组织切片进行全景扫描，得到各种荧光素颜色及激发与发射波长图表；S43，对小鼠肺组织在干冰上用研磨杵加液氮研磨碎，并分装至4个1.5mlEP管中，液氮速冻后-80℃保存；S44，对液氮中研磨分装的肺组织进行WesternBlotting检测以及QPCR检测，得到最终的检测数据；S5，通过上述检测结果，明确小鼠海水淹溺肺损伤早期的主要发病机制，完成操作。

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百度查询： 中国人民解放军总医院第一医学中心 基于小鼠经口喉镜下注射人工海水导致肺损伤的检测方法