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摘要：本发明公开了一种用于检测肿瘤和血浆样本中单核苷酸变异的方法，涉及生物检测领域，方法包括如下步骤：步骤一，样品制备；步骤二，混合物制备；步骤三，微滴生成；步骤四，对每个微滴都将进行完全独立的PCR扩增反应；步骤五，荧光检测；步骤六，数据分析；本发明MSA‑ddPCR方法特异性高，灵敏度强，结果准确，且快速，可以轻松地应用于临床实践中。
主权项：1.一种用于检测肿瘤和血浆样本中单核苷酸变异的方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤一，样品制备；步骤二，混合物制备；步骤三，微滴生成；步骤四，对每个微滴都进行完全独立的PCR扩增反应，所述PCR扩增反应采用将扩增阻滞突变系统和数字液滴核酸扩增技术相结合的突变选择扩增液滴数字PCR方法；步骤五，荧光检测：延伸阶段：长野生型引物能与所有含有TP53WT位点的DNA结合并成功延伸，当长突变引物结合到TP53WT模板时，由于长突变引物3'端碱基错配，延伸反应受阻；相反，当长突变引物与突变体模板结合时，会成功向前延伸在延伸阶段；含有长突变引物5'端额外片段的双链DNA与引物和探针相互作用，随后发出相应的荧光信号；荧光检测阶段：通过结合突变探针或野生探针，可检测到引物结合过程中产生的双链DNA的荧光信号；含有野生型DNA的微滴可在VIC通道检测到荧光信号，含有突变型DNA的微滴可在FAM通道检测到荧光信号，不含目标DNA分子的微滴为阴性微滴，分析仪器自动收集所有微滴中不同通道发出的荧光信号，并将其分为不同的簇；步骤六，数据分析：根据泊松分布计算出每个样本中野生型基因和突变型基因的拷贝数，并确定变异等位基因频率，最终生成临床检测报告。
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百度查询： 宁波市第二医院 一种用于检测肿瘤和血浆样本中单核苷酸变异的方法
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