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一种大肠杆菌利用营养型甜味剂-蔗糖高效合成D-阿洛酮糖的方法 

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摘要:本发明涉及代谢工程领域,提供一种大肠杆菌利用营养型甜味剂‑蔗糖高效合成D‑阿洛酮糖的方法,通过重组大肠杆菌利用廉价传统的营养型甜味剂生产D‑阿洛酮糖,利用大肠杆菌JM109DE3为底盘宿主,通过在野生型大肠杆菌中引入外源蛋白蔗糖‑6‑磷酸水解酶CscA、蔗糖渗透酶CscB、果糖激酶CscK、D‑阿洛酮糖‑6‑磷酸差向异构酶AlsE和D‑阿洛酮糖‑6‑磷酸磷酸酶A6PP实现共同表达,构建了一条从蔗糖生产D‑阿洛糖的路径。通过引入ptsG‑F和敲除ptsG、fruA、ptsI和ptsH来重新规划糖跨膜转运途径,从而提高了底物利用率。

主权项:1.一种大肠杆菌利用营养型甜味剂-蔗糖高效合成D-阿洛酮糖的方法,其特征在于:以大肠杆菌JM109DE3为底盘宿主,通过引入外源基因蔗糖-6-磷酸水解酶CscA、蔗糖渗透酶CscB、果糖激酶CscK、D-阿洛酮糖-6-磷酸差向异构酶AlsE和D-阿洛酮糖-6-磷酸磷酸酶A6PP,初步构建D-阿洛酮糖的合成途径;通过引入ptsG-F和敲除ptsG、fruA、ptsI和ptsH来重新编码蔗糖水解产生的D-葡萄糖和D-果糖的运输途径,实现蔗糖水解产物的共利用;最终,通过pfkA和zwf的失活来调节Embden-Meyerhof-ParnasEMP途径和磷酸戊糖PP途径的碳通量,强化D-阿洛酮糖的合成路径,通过放大培养优化细胞生长,成功构建了以蔗糖为底物高效合成D-阿洛酮糖的细胞工厂。

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权利要求:

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