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申请/专利权人：江苏沿海地区农业科学研究所

摘要：本发明涉及一种采用EMS甲基磺酸乙酯诱变剂快速创制耐盐水稻种质的方法，属于植物育种技术领域。辐射所选材料是以优良综合性状水稻品种A为母本，以耐盐性强的水稻品种B为父本进行杂交得到的F1代AB，通过对耐盐水稻愈伤组织进行诱变处理，结合水稻芽期在实验室0.2～1.0％盐份条件下进行耐盐性鉴定，将筛选出的幼苗单株在3～4叶秧龄时移栽到盐份浓度为0.2～1.0％人工盐池进行种植鉴定，成熟时选择产量、品质均优于母本的单株种子，后面进行多次上述耐盐筛选验证，使得选育的水稻耐盐性保持稳定。本发明获得了耐盐水稻新种质同时也为耐盐水稻基因定位提供了新的突破点。

主权项：1.本发明为一种高效创制水稻耐盐种质的方法，包括以下步骤：1选择两个水稻品种A和品种B，以品种A为母本，以品种B为父本进行杂交得到F1代AB；所述水稻品种A要求综合性状优良，具体选取盐稻12号或盐稻21号；所述水稻品种B，具体选取苗期耐盐性达到0.3～0.5％的耐盐水稻品种海稻86或FL478。2水稻外植体准备，选取杂交得到F1代AB作为诱导愈伤组织的外植体。3诱导愈伤组织，将准备好的种子放入锥形瓶，用3％次氯酸钙溶液没过种子，密封置于摇床上，转速150rmin，消毒3h，用无菌水清洗3遍。放于4℃下过夜10h。第二天，再用3％次氯酸钙溶液同样操作在摇床上消毒1h，用无菌水清洗3遍后，放在无菌滤纸上吹干至表面无水。将吹干的种子均匀放在N6-D诱导培养基上。在28℃条件下黑暗培养至大部分愈伤组织直径约0.5mm时即可继代，约20天。4EMS诱变剂处理愈伤组织，处理设置5个浓度，分别为质量-体积浓度0、0.2％、0.4％、0.6％、0.8％；3个时间长度分别为1h、2h、3h，每组3个重复。用50mL的离心管作为诱变容器，用锡纸包裹离心管防止EMS见光分解，后放在25℃黑暗条件下、转速120rmin的摇床进行处理。处理后的愈伤组织在超净工作台内用无菌水清洗5-6遍，清洗后放在无菌滤纸上，吹干至表面无水。吹干后的愈伤组织放在继代培养基上恢复培养。5愈伤组织盐胁迫，盐胁迫设置5个浓度，分别为质量-体积浓度0‰、4‰、6‰、8‰、10‰。将诱变后浅黄色的胚性愈伤组织呈小碎块状间隔一定距离均匀放置于盐胁迫培养基上，用灭菌的药匙轻压，使每一块愈伤组织都能接触到培养基。在28℃黑暗条件下继代培养30天，计算恢复生长率。6抗盐愈伤组织分化，为了使愈伤组织耐盐性进一步稳定及验证，分化时的培养基与盐胁迫继代培养基有相同含量的NaCl含量。将盐胁迫后生长状况良好即颜色浅黄的愈伤组织颗粒成紧密状放在分化培养基上，每个培养基至多3块。分化出苗后移到相同盐浓度的生根培养基上进行生根培养，根长度为2-3cm长时进行炼苗打开瓶盖，加入适量水在室温下放置两天，然后洗净根部琼脂，放在A培养液中壮苗。每3天更换一次A营养液，直到苗高约15cm、根部明显生长时进行移栽。7盐池鉴定与农艺性状观察，将筛选出来的分化幼苗单株移栽到相应盐分浓度的盐池条件下种植，设置空白对照，进行水稻生长的中后期耐盐性筛选鉴定，成熟时选择农艺性状优于对照的单株种子进行收获；8以后连续重复7工作，边自交边选择，种植2-3代后选育出耐盐性达4～10‰的耐盐水稻突变体及耐盐新种质，耐盐性和农艺性状均优于对照。

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百度查询： 江苏沿海地区农业科学研究所 一种高效创制水稻耐盐种质的方法