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摘要：本发明涉及一种高通量筛选蛋白质互作的体系B2H‑seq及使用方法，属于生物技术领域。本发明首先构建了四种质粒骨架，然后将诱饵蛋白与T25融合，猎物蛋白与T18融合组成猎物蛋白库，构建出高通量筛选蛋白质互作的体系B2H‑seq，本发明应用于高通量检测文库中所有可能的蛋白与蛋白相互作用。基于此方法，本发明通过构建不可培养韧皮部杆菌967个猎物蛋白组成猎物蛋白库，筛选并鉴定得到了与PopZ蛋白互作的17个猎物蛋白。本发明在鉴定蛋白质互作时使用蛋白全长开放阅读框，结合第三代测序读长较长的特点，可以高通量筛选和及定量鉴定文库中所有可能的蛋白之间的相互作用。
主权项：1.一种高通量筛选蛋白质互作的体系B2H-seq的构建方法，其特征在于，所述构建方法如下：（1）质粒骨架的构建：四个蛋白相互作用筛选的质粒骨架，分别为p2518、p2518C、pN2518和pN2518C，所述p2518、p2518C、pN2518和pN2518C的核苷酸序列分别如SEQIDNO.1、SEQIDNO.2、SEQIDNO.3和SEQIDNO.4所示；（2）将诱饵蛋白与百日咳杆菌腺苷酸环化酶的T25区段融合，猎物蛋白与百日咳杆菌腺苷酸环化酶的T18区段融合组成猎物蛋白库，进一步形成质粒文库，即为高通量筛选蛋白质互作的体系B2H-seq。
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百度查询： 中山大学 一种高通量筛选蛋白质互作的体系B2H-seq及使用方法
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