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申请/专利权人：内蒙古自治区农牧业科学院
摘要：本发明提供了一种支原体突变株及其制备方法与应用，所述支原体突变株中同时含有两个LoxP和一个FRT位点，FRT位点位于两个LoxP位点之间；或者同时含有一个LoxP和两个FRT位点，LoxP位点位于两个FRT位点之间；所述LoxP和FRT位点位于非开放式阅读框中。还包括制备支原体突变株所用的载体，制备单基因缺失株所用的载体以及构建单或多基因缺失株的方法。更进一步的，本发明还提供了用来制备无外源基因表达的基因缺失型支原体的方法。通过本发明的技术方案，可以高效的利用FRT或者LoxP位点制备各种感兴趣的基因缺失株。并可进一步的制备无外源蛋白表达的基因缺失型支原体。与现有技术相比本发明实验成本低，实验效率高，实验周期短，不需要先建立支原体缺失株文库。
主权项：1.一种制备单基因缺失型绵羊肺炎支原体的方法，其特征在于，将FLP重组酶质粒与重组载体转入绵羊肺炎支原体突变株中构建单基因缺失型绵羊肺炎支原体；所述重组载体包括以下元件：基因调控序列-sgRNA-化脓性链球菌CRISPRCas9系统的gRNA骨架-纤维蛋白终止子-胞嘧啶碱基编辑器序列-纤维蛋白终止子-正向FRT识别位点-四环素抗性基因-pUC复制子；所述绵羊肺炎支原体突变株的制备方法为：利用含转座子的载体在绵羊肺炎支原体基因组中的非开放式阅读框中插入两个LoxP和一个FRT位点，FRT位点位于两个LoxP位点之间；所述含有转座子的载体以PUC-SP为骨架载体在SmaI位点插入以下元件：基因调控序列-Tn4001转座酶基因序列-左向末端反向重复序列-正向LoxP识别位点-正向FRT识别位点-庆大霉素抗性基因-正向LoxP识别位点-右向末端反向重复序列；所述基因调控序列如SEQIDNO.7所示；所述转座酶为Tn4001转座酶，基因序列如SEQIDNO.8所示；所述左向末端反向重复序列如SEQIDNO.9所示；所述正向LoxP识别位点序列如SEQIDNO.10所示；所述正向FRT识别位点序列如SEQIDNO.11所示；所述庆大霉素抗性基因序列如SEQIDNO.12所示；所述右向末端反向重复序列如SEQIDNO.13所示。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 内蒙古自治区农牧业科学院 一种支原体突变株及其制备方法与应用
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