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申请/专利权人：伊鲁米那股份有限公司
摘要：利用具有或具有模板转换寡核苷酸的转座以产生具有UMI和空间条形码信息的文库的RNA测序文库制备方法，以及使用模板转换和热扩增来改善从组织样本制备RNA文库以改善RNA文库质量的方法。
主权项：1.一种用于制备RNA序列文库的方法，所述方法包括：将组织样本安装在包含多个捕获寡核苷酸的基底上，其中所述捕获寡核苷酸包含polyT序列和含有空间条形码序列SBC的文库条形码信息；用所述捕获寡核苷酸捕获所述基底上的多聚腺苷酸化mRNA转录物；在产生第一链的条件下使所述基底与包含逆转录酶和模板转换寡核苷酸TSO的第一链合成混合物接触，所述第一链包含与所述多聚腺苷酸化mRNA转录物互补的第一cDNA和与所述第一cDNA的5'端杂交的TSO互补序列，其中所述逆转录酶在所述第一cDNA的所述5'端掺入未模板化的胞嘧啶核苷酸，并且所述TSO包含与所述未模板化的胞嘧啶核苷酸杂交的序列，并且所述逆转录酶延伸以在所述第一cDNA的所述5'端产生作为所述TSO的互补物的所述TSO互补序列；从所述基底上洗脱所述多聚腺苷酸化mRNA转录物；使所述第一链与包含TSO引物的第二链合成混合物接触，并且使用所述第一链作为模板延伸所述TSO引物，以产生与所述第一链互补的第二链，所述第二链包含所述TSO、与所述第一cDNA互补的第二cDNA、以及包含与所述空间条形码序列SBC互补的空间条形码序列互补序列SBC'的第二链条形码信息；洗脱所述第二链；使所述第二链与包含Poly-TVN引物的Poly-TVN延伸混合物接触，并且使用所述第二链作为模板延伸所述Poly-TVN引物，以产生双链产物，同时维持含有所述文库条形码信息的单链3'区域；在对双链产物进行标签化的条件下使所述双链产物与转座体接触，以形成包含唯一分子标识符UMI和PCR衔接子的标签化产物；以及使用索引PCR扩增所述标签化产物，以产生所述文库。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 伊鲁米那股份有限公司 基于空间转座的RNA测序文库制备方法
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