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申请/专利权人:深圳瑞德林生物技术有限公司
摘要:本发明涉及生物医药领域,特别涉及蜂毒肽的制备方法。本发明的目的是提供一种简单方便的表达蜂毒肽的方法,在大肠杆菌宿主中表达包含蜂毒肽的融合蛋白,包括融合标签、连接肽、酶切位点和蜂毒肽序列。融合蛋白主要以有活性包涵体的形式存在细胞内,表达量高,并且通过超声或高压将细胞破碎后从细胞内释放出来,不需要经过变性和复性的过程。破碎液离心收集得到的沉淀直接加缓冲液和工具酶酶切后,蜂毒肽片段释放到上清中。该方法得到的蜂毒肽不仅表达量高,并且后续处理过程简单,有利于工业化放大生产。
主权项:1.蜂毒肽融合蛋白,其特征在于,包括融合标签、连接肽、EK酶切位点和蜂毒肽;I、所述融合标签具有如SEQIDNo.7所示的氨基酸序列;和或所述连接肽具有如SEQIDNo.8所示的氨基酸序列;和或所述EK酶切位点具有如SEQIDNo.9所示的氨基酸序列;和或所述蜂毒肽具有如SEQIDNo.10所示的氨基酸序列;或II、如I所示的氨基酸序列经修饰、取代、缺失或添加一个或多个氨基酸残基获得,且与I所示的氨基酸序列功能相同或相似的氨基酸序列;或III、与如I或II所示的氨基酸序列具有至少80%同源性,且与I或II所示的氨基酸序列功能相同或相似的氨基酸序列;所述融合标签、连接肽、EK酶切位点和蜂毒肽依次连接。
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