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申请/专利权人：无锡市第二人民医院

摘要：本申请公开一种多壁碳纳米管构建小鼠白血病模型的方法及应用，制备MWCNTs溶液，将一种由MuLV改造而来的小鼠白血病病毒注入新生小鼠腹膜内，在注射MOL4070LTR后，每隔2周向每只小鼠皮下注射0.2mgMWCNTs溶液，利用MWCNTs的致炎效应，能够诱导巨噬细胞释放促炎细胞因子，并增加巨噬细胞内的活性氧，这些致炎效应加速了潜伏感染MuLV的小鼠罹患上白血病，因此，将小鼠暴露于MWCNTs能够加速MuLV病毒诱发的自发性白血病的形成，由此而构建的白血病小鼠动物模型，在炎性白血病的诊断方法开发和治疗药物筛选中，具有潜在的重要应用价值。

主权项：1.一种多壁碳纳米管构建小鼠白血病模型的方法，其特征在于，包括以下步骤：第一步：将MWCNTs在浓H2SO4HNO3混合物中氧化12h，然后在750W下探头超声100s获得氧化产物：第二步：氧化产物使用孔径为2μm的膜和蒸馏水冲洗和过滤，直到pH值恢复到7.0，并在50℃的真空烘箱中干燥至恒重；第三步：50℃干燥后的MWCNT超声分散于蒸馏水中，再在超声仪中360W探头超声分散60s,1540gmin离心20min，去除水相中未分散的物质，制备出2mgmL的MWCNT溶液；第四步：在3mgmLN-3-二甲基氨基丙基-N’-乙基碳二亚胺盐酸盐存在下，将终浓度为1mgmLMWCNT溶液与10mgmLPEG聚合物混合并进行30分钟水浴超声处理；第五步：在24℃下搅拌反应12小时，过量的PEG聚合物通过截留分子量为100kDa的AmiconUltra离心过滤器过滤去除，然后水洗5次制得MWCNTs-PEG；第六步：使用紫外分光光度计在260纳米波长处测定MWCNTs和MWCNTs-PEG的浓度；第七步：将获得的MWCNTs和MWCNT-PEG溶液滴在玻璃基底上，并在24℃下干燥，以进行扫描电子显微镜观察；第八步：通过对10张SEM图像中400个纳米管的随机计数，得到氧化后MWCNTs的长度分布；第九步：小鼠巨噬细胞系RAW264.7和感染MOL4070LTR病毒的NIH3T3细胞均在DMEM培养基中培养；第十步：MOL4070LTR病毒注入新生小鼠腹膜内，取MWCNTs或MWCNTs-PEG于100μL无菌水中制得MWCNTs或MWCNTs-PEG溶液，在注射MOL4070LTR后每隔2周皮下注射0.2mg只MWCNTs或MWCNTs-PEG溶液；第十一步：检测分析。

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