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用于成对测序的组合物和方法 

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申请/专利权人:元素生物科学公司

摘要:本公开提供了用于进行成对测序和用于生成用于成对测序的串联体模板分子的组合物和采用所述组合物的方法。所述串联体可使用在支持物上进行或在溶液中进行的滚环扩增反应来生成,并且然后被分布到支持物上。所述滚环扩增反应生成含有感兴趣序列和至少一个通用衔接子序列的串联拷贝的串联体。给定串联体中的串联拷贝的数量中的增加增加了沿所述串联体用于与多个测序引物杂交的位点的数量,所述多个测序引物充当针对聚合酶催化的测序反应的多个起始位点。当所述测序反应采用经可检测地标记的核苷酸和或经可检测地标记的多价分子例如,具有核苷酸单元时,由参与沿所述串联体的并行测序反应的所述核苷酸或核苷酸单元发出的信号产生对于每个串联体而言增加的信号强度。

主权项:1.一种用于成对测序的方法,所述方法包括:a提供多个经固定的单链核酸串联体模板分子,每个经固定的单链核酸串联体模板分子包含具有易裂开部分的至少一个核苷酸,所述易裂开部分可被裂解以在所述串联体模板分子中生成脱碱基位点,其中所述多个中的单独的串联体模板分子被固定至第一表面引物,所述第一表面引物被固定至支持物,并且其中经固定的第一表面引物缺失具有易裂开部分的核苷酸;b对所述多个经固定的串联体模板分子进行测序,从而生成多条延伸的正向测序引物链,其中单独的经固定的串联体模板分子具有在其上杂交的两条或更多条延伸的正向测序引物链;c保留所述多个经固定的串联体模板分子,并且通过进行引物延伸反应来用与保留的经固定的单链核酸串联体模板分子杂交的多条正向延伸链替换所述多条延伸的正向测序引物链;d通过在所述经固定的单链串联体模板分子中在具有所述易裂开部分的所述核苷酸处生成脱碱基位点,并且在所述脱碱基位点处生成间隙以生成多个含有间隙的单链核酸串联体模板分子,来移除所述保留的经固定的串联体模板分子,同时保留所述多条正向延伸链并且保留多个经固定的表面引物;以及e对多条保留的正向延伸链进行测序,从而生成多条延伸的逆向测序引物链,其中单独的保留的正向延伸链具有在其上杂交的两条或更多条延伸的逆向测序引物链。

全文数据:

权利要求:

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