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申请/专利权人：海南医学院

摘要：本发明涉及一种登革病毒NS1基因片段裸眼检测平台在制备登革病毒感染筛查的试剂盒中的应用，所述检测平台包括杂交液与AuNRs溶液；所述杂交液是通过采用DNA探针H1和H2对DENV‑NS1序列进行杂交链式反应得到杂交反应液；向杂交反应液加入捕获探针、信号放大探针以及底物显色液；对杂交反应液进行反应终止操作得到的；所述AuNRs溶液是通过向种子生长液中加入种子溶液搅拌均匀、孵育并纯化得到的；所述裸眼检测平台在使用时采用AuNRs溶液对杂交液进行AuNRs蚀刻并观察结果。本发明无需复杂昂贵的大型仪器及专业人员即可实现裸眼对DENV‑NS1核酸检测，可用于DENV感染筛查。

主权项：1.一种登革病毒NS1基因片段裸眼检测平台在制备登革病毒感染筛查的试剂盒中的应用，其特征在于，所述裸眼检测平台包括杂交液与AuNRs溶液；所述杂交液是通过采用DNA探针H1和H2对DENV-NS1序列进行杂交链式反应得到杂交反应液；向杂交反应液加入捕获探针、信号放大探针以及底物显色液；对杂交反应液进行反应终止操作得到的；所述探针H1和H2是HCR探针；所述DENV-NS1序列为5’AGAAAGTGAAAAGAACGAGACC3’；所述AuNRs溶液是通过向种子生长液中加入种子溶液搅拌均匀、孵育并纯化得到的；所述裸眼检测平台在使用时采用AuNRs溶液对杂交液进行AuNRs蚀刻并观察结果；所述杂交液的制备方法包括以下步骤：S01：采用DNA探针H1和H2对DENV-NS1序列进行杂交链式反应得到杂交反应液；S02：向杂交反应液加入捕获探针、信号放大探针以及底物显色液；S03：对杂交反应液进行反应终止操作得到杂交液；所述AuNRs溶液的制备方法包括以下步骤：1制备种子液与种子生长液；2所述种子生长液中加入种子溶液搅拌均匀并孵育得到AuNRs溶液；3对AuNRs溶液进行纯化；所述捕获探针为磁性纳米颗粒-链霉亲和素捕获探针MBs-SA；所述信号放大探针为辣根过氧化物酶-链霉亲和素信号放大探针HRP-SA；所述底物显色液为ELISA底物显示液，所述ELISA底物显示液为3,3',5,5'-四甲基联苯胺TMB底物溶液；所述底物显色液中TMB浓度为250μgmL；所述步骤S03的反应终止操作是向杂交反应液加入终止液；所述终止液为ELISA终止液，所述ELISA终止液为2M硫酸溶液；所述种子液是通过向十六烷基三甲基溴化铵CTAB溶液中依次加入氯金酸HAuCl4溶液以及硼氢化钠溶液制得的；所述种子生长液是通过向十六烷基三甲基溴化铵CTAB溶液中依次加入5-溴水杨酸溶液、硝酸银AgNO3溶液、氯金酸HAuCl4溶液以及抗坏血酸AA溶液制得的；所述步骤2中孵育得到的AuNRs溶液为酒红色溶液。

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