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申请/专利权人：潍坊医学院

摘要：本发明属于生物技术领域，具体涉及一种用于检测结核与非结核分枝杆菌的引物探针组合物及试剂盒和检测方法。用于检测结核分枝杆菌的组合物1包括：核苷酸序列如SEQNO:1‑3所示；用于检测非结核分枝杆菌的组合物2‑4包括：核苷酸序列如SEQNO:4‑12所示。本发明采用双重RAA‑LFD检测，一次反应实现四种常见分枝杆菌：结核分枝杆菌、鸟胞内分枝杆菌复合体、堪萨斯分枝杆菌、脓肿分枝杆菌的鉴别诊断。在双重RAA的基础上引入LFD进行快速、准确且可视化检测，极大地减低了检测成本，缩短了检测时间。无需昂贵机器，恒温进行扩增，肉眼进行结果判读，具有超高的灵敏度，检测限最高可达到单个拷贝反应。

主权项：1.一种用于检测结核与非结核分枝杆菌的引物探针组合物，其特征是：用于检测结核分枝杆菌的组合物1包括：核苷酸序列如SEQNO:1所示的上游引物；核苷酸序列如SEQNO:2所示的下游引物；核苷酸序列如SEQNO:3所示的探针；用于检测非结核分枝杆菌的组合物2包括：核苷酸序列如SEQNO:4所示的上游引物；核苷酸序列如SEQNO:5所示的下游引物；核苷酸序列如SEQNO:6所示的探针；用于检测非结核分枝杆菌的组合物3包括：核苷酸序列如SEQNO:7所示的上游引物；核苷酸序列如SEQNO:8所示的下游引物；核苷酸序列如SEQNO:9所示的探针；用于检测非结核分枝杆菌的组合物4包括：核苷酸序列如SEQNO:10所示的上游引物；核苷酸序列如SEQNO:11所示的下游引物；核苷酸序列如SEQNO:12所示的探针；所述组合物2用于检测鸟胞内分枝杆菌复合体；所述组合物3用于检测堪萨斯分枝杆菌；所述组合物4用于检测脓肿分枝杆菌；所述SEQNO:2和SEQNO:10的5’端用生物素Biotin进行修饰；所述SEQNO:3和SEQNO:12的5’端用FAM进行修饰，离5’端第31位碱基用四氢呋喃THF修饰，3’端设有聚合酶延伸阻断基团C3spacer；所述SEQNO:5的5’端用罗丹明TAMRA进行修饰；所述SEQNO:6的5’端用Digxin进行修饰，离5’端第30位碱基用四氢呋喃THF修饰，3’端有聚合酶延伸阻断基团C3spacer；所述SEQNO:8的5’端用TAMRA和Digxin进行修饰，3’端有聚合酶延伸阻断基团C3spacer；所述SEQNO:9的离5’端第32位碱基用四氢呋喃THF修饰。

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