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申请/专利权人：青岛科技大学

摘要：本发明构建了一种基于双极电极BPE电发光ECL和手机成像的双模传感器平台，用于海水中卡那霉素的检测。CN‑NV‑550显示极强的ECL信号，方便手机成像。将BPE与DNA循环扩增技术相结合，防止了靶体与发光材料之间的相互干扰，实现了信号的放大。在靶Kana存在时，通过DNA循环扩增产物在BPE阳极引入Co3O4加速尿酸氧化速率，极大提高了CN‑NV‑550在BPE阴极的电化学发光信号，实现了Kana的ECL检测和手机成像分析。本研究将CN‑NV‑550的ECL成像和Co3O4的高电催化活性整合到BPE‑ECL检测中，为抗生素分析提供了新的方法，在海洋环境污染监测方面具有很大的实际应用潜力。

主权项：1.一种双极电极电化学发光传感和手机成像检测卡那霉素的方法，其特征是：以CN-NV-550为信号分子，Co3O4氧化UA加速电子传递的cBPE-ECL生物传感器，实现了对Kana的灵敏ECL和手机成像检测，具体步骤如下：步骤1.Co3O4的合成：将0.12MCoNO32·6H2O前体溶于10mL二次水中，然后将0.3MNaOH滴加到CoNO32·6H2O中，直到pH达到9，将所得溶液在磁力搅拌下保持10分钟，以均匀混合溶液；然后将溶液混合物转移至50mL高压反应釜中，并在180℃下保持6h，然后冷却；最后，将沉淀在5000rpm下离心10min，在二次水中洗涤3次，在60℃下干燥，并在450℃下退火2h；步骤2.CN-NV-550的合成：将10.0g三聚氰胺在管式炉中550℃下在空气中煅烧4h；冷却后，将块状骨料磨成粉末，得到原始CN；然后将原始CN在管式炉中在N2气氛下于550℃下再处理2h，冷却得到样品CN-NV-550；将1.0mg粉末CN-NV-550加入100mL5MHNO3中，125℃回流24h，离心，最后在60℃烘箱中干燥，获得纯化的CN-NV-550；步骤3.ExoⅢ辅助循环扩增:首先将20μL10-6M目标Kana与200μL10-6MS1在37℃下杂交2h，形成双链，然后加入10μL不同浓度的Kana溶液反应2小时，并添加10-6M发夹H1；最后，将20UExoⅢ添加到混合物中并切割75分钟以获得输出单链S0；步骤4.BPE-ECL生物传感器的构建：该传感器由两个电解池组成，使用玻碳电极作为工作电极；首先，100μL5μMS2和40μL10μMTCEP在37℃下反应1h，活化所需巯基，再将上述溶液20μL与80μL2.5mg·mL-1Co3O4在37℃下反应过夜，得到信号探针S2-Co3O4。在BPE的阳极侧，将GCE浸入3mMHAuCl4中，在-0.2V恒定电势下在电极表面电沉积一层金，持续45s；将6μL5μMcDNA滴在电极上于室温孵育过夜，然后用1mMMCH封板2小时；再加入6μL单链S0，37℃反应2h，最后将信号探针S2-Co3O4连接到电极上；在BPE的阴极侧，将6μLCN-NV-550滴到GCE上进行干燥；步骤5.ECL检测和手机成像分析：将含有0.05MK2S2O8的0.1M，pH＝7.4PBS溶液加入BPE阴极中进行BPE-ECL测试；光电倍增管电压设为300V，电位扫描范围为0～5.8V，扫描速率为0.3Vs；用移动手机在5.8V驱动电压下对不同浓度的Kana进行ECL成像，所有检测步骤与上述相同。

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