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申请/专利权人:湖北省肿瘤医院(湖北省肿瘤研究所)
摘要:本发明涉及肿瘤原代细胞培养技术领域,具体公开了一种泌尿系肿瘤原代细胞的培养方法,包括:S1、组织样本采集和处理,S2、组织消化和细胞分离,S3、细胞收集和培养,S4、基因编辑和功能研究,S5、3D培养模型的建立,S6、单细胞分析和细胞异质性研究以及S7、培养和传代;本发明使用胶原蛋白涂层培养瓶和适应的培养基配方,有助于维持泌尿系肿瘤原代细胞的健康状态,保证其在培养过程中的稳定性和可重复性;通过低氧培养条件,模拟肿瘤组织内的低氧环境,促进细胞的生长和适应性,使得培养的细胞更符合实际肿瘤微环境的特征,建立3D球体模型有助于更真实地模拟肿瘤组织的结构和生长方式,提供更准确的药物筛选平台和生物学行为评估。
主权项:1.一种泌尿系肿瘤原代细胞的培养方法,其特征在于,包括以下步骤:S1、组织样本采集和处理,从手术中获取泌尿系肿瘤组织,将组织放入含冷PBS的无菌容器中,并迅速送至实验室;S2、组织消化和细胞分离,在生物安全柜中,将组织转移到新的无菌培养皿中,用冷PBS清洗去除血液和碎片;将组织剪成1~2mm3体积的块状,加入消化液,37℃,60~100rpm条件下,搅拌1~2小时,在搅拌的最后15分钟加入Trypsin-EDTA进行细胞解离;S3、细胞收集和培养,将消化液过滤,用RPMI-1640培养基中和,离心收集细胞沉淀,重悬细胞,将细胞悬液接种于胶原蛋白涂层的培养瓶中,将培养瓶置于氧气培养箱中,模拟肿瘤组织中的氧气环境,促进细胞生长和适应;S4、基因编辑和功能研究,使用CRISPR-Cas9系统进行特定基因的编辑,设计sgRNA并转染细胞,筛选编辑成功的细胞群体;S5、3D培养模型的建立,在低附着力培养皿中培养细胞形成3D球体,观察其在三维结构中的行为和药物反应;S6、单细胞分析和细胞异质性研究,使用流式细胞仪技术分离单个细胞,进行单细胞RNA测序,即scRNA-seq分析,研究细胞异质性及其在肿瘤中的功能表现;S7、培养和传代,每2~3天更换培养基,根据细胞生长情况进行传代,保持细胞的活力和稳定性。
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权利要求:
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