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申请/专利权人：特丰制药有限公司;新疆特丰药业股份有限公司;新疆新姿源生物制药有限责任公司

摘要：本发明公开了一种判定公马精子质量的方法，包括如下步骤：处理公马尿；采用液质联用分析仪对结合雄激素甲醇溶液进行检测；根据检测到的雄激素代谢物的含量，判断公马精子质量。本发明具有简单、经济、检测快速、准确、节能环保等优点。通过公马尿液中雄激素葡萄糖醛酸结合物能够更好的呈现公马由于发情作用引起的激素水平变化情况，可将这些组分作为公马精子质量优劣的代谢标志物，更准确的确认公马的精子质量，选择最优配种时间。

主权项：1.一种判定公马精子质量的方法，其特征在于，包括如下步骤：第一步，采集公马尿液，将尿液离心、固相萃取，得甲醇洗脱液；第二步，采用液质联用分析仪对第一步中得到甲醇洗脱液进行含量检测；液相色谱测定条件为：色谱柱为C18；以0.05%-0.5%甲酸溶液为流动相A、乙腈为流动相B进行梯度洗脱，流速为0.1-0.5mlmin，柱温为30-50℃，运行时长为30-50min，进样量为1μl；质谱条件为：电喷雾离子源ESI，负离子模式，扫描方式为数据依赖性监测IDA，喷雾电压为-4500V，喷雾温度为550℃；雾化气gas1：55psi；辅助气gas2：55psi；碰撞气CADgas：7psi；气帘气Curtaingas35psi；去簇电压DP：-80V；碰撞电压CE：-35V；扫描分子量范围：10-1000Da；梯度洗脱的程序为：洗脱梯度为：0min：95%流动相A+5%流动相B；3min：90%流动相A+10%流动相B；10min：85%流动相A+15%流动相B；30min：75%流动相A+25%流动相B；36min：50%流动相A+50%流动相B；38min：10%流动相A+90%流动相B；42min：10%流动相A+90%流动相B；42.1min：95%流动相A+5%流动相B；45min：95%流动相A+5%流动相B；第三步，将每匹公马每次采集尿液中睾酮葡萄糖醛酸、雄酮葡萄糖醛酸和雄甾二醇葡萄糖醛酸的含量通过excel、simca-p拟合参考曲线，最后通过公马爬跨法验证检测结果，确定高质量公马精子的睾酮葡萄糖醛酸、雄酮葡萄糖醛酸和雄甾二醇葡萄糖醛酸的区间阈值；所述睾酮葡萄糖醛酸的高质量公马精子区间阈值为40~120μgml，所述雄酮葡萄糖醛酸的高质量公马精子区间阈值为5~50μgml，所述雄甾二醇葡萄糖醛酸的高质量公马精子区间阈值为5~40μgml；第四步，睾酮葡萄糖醛酸、雄酮葡萄糖醛酸和雄甾二醇葡萄糖醛酸的含量均低于或等于其对应的高质量公马精子区间阈值，则判定所测公马精子质量低；睾酮葡萄糖醛酸、雄酮葡萄糖醛酸和雄甾二醇葡萄糖醛酸中的一种的含量高于其对应的发情区间阈值，则判定所测公马精子质量高。

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