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申请/专利权人：福建师范大学
摘要：本发明公开了一种适用于链霉菌活细胞的功能核酸探针导入方法，本发明首先构建了四环素特异性分子信标核酸探针FAM‑Tc‑BHQ1，然后将FAM‑Tc‑BHQ1与穿膜肽KH9‑BP100于室温进行混合孵育，制备穿膜肽‑核酸适配体分子信标复合物，并且提供了一种适用于链霉菌活细胞的功能核酸探针导入方法。本发明以四环素类抗生素产生菌金色链霉菌为模型，开展了穿膜肽介导的四环素特异性分子信标的活细胞载运及靶标检测研究。本发明采用穿膜肽非共价偶联四环素特异性分子信标，实现了分子信标的金色链霉菌活细胞载运及胞内四环素的单细胞水平活细胞荧光检测。
主权项：1.一种适用于链霉菌活细胞的功能核酸探针导入方法，其特征在于：包括如下步骤：将1μL核酸适配体分子信标FAM-Tc-BHQ1加入至终体积100μL的缓冲液溶液中，95℃变性10min，自然冷却到室温30min，然后再添加1.5μL穿膜肽KH9-BP100，室温孵育30-60min以形成穿膜肽-核酸适配体分子信标复合物，将穿膜肽-核酸适配体分子信标复合物与链霉菌活细胞在34℃避光孵育60min，吸附在细胞上未进入细胞内部的穿膜肽-核酸适配体分子信标复合物以0.25%胰蛋白酶在37℃消化5min，并用缓冲液溶液洗涤2次；所述穿膜肽KH9-BP100的氨基酸序列为KHKHKHKHKHKHKHKHKHKKLFKKILKYL；所述核酸适配体分子信标FAM-Tc-BHQ1序列为5’-FAM-CCGGCGGGCCCCCGGCAGGCCACGGCTTGGGTTGGTCCCACTGCGCGTCCCGCCGG-BHQ1-3’；所述缓冲液溶液中NaCl的终浓度为200mM，Tris-HCl的终浓度为20mM，缓冲溶液的pH为7.2。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 福建师范大学 一种适用于链霉菌活细胞的功能核酸探针导入方法及其应用
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