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申请/专利权人：天津科技大学

摘要：本发明提供了一种尿苷生产菌株及其构建方法与应用，所述菌株利用CRIPSRCas9基因编辑技术通过敲除E.coliOra12基因组上rihA、rihB、rihC、udk、udp和ppnN基因，阻断了尿苷降解和UMP一步到尿嘧啶途径；敲除nupG基因、nupC基因，减少尿苷胞内运输；再通过敲除iclR基因,异源引入枯草芽孢杆菌B.subtilis168中核糖磷酸焦磷酸激酶基因prs、乳清酸核苷单磷酸脱羧酶基因pyrF和乳清酸核糖基转移酶基因pyrE，过表达UMP磷酸水解酶基因umpH，弱化尿苷酸激酶基因pyrH，弱化尿苷酸激酶基因，所获得的菌株遗传稳定性好、发酵产率高，可稳定生产尿苷。

主权项：1.一种尿苷生产菌株，其特征在于：是利用定向改造方法在出发菌株E.coliOra12的基础上进行进一步改造获得的，具体为：在E.coliOra12基因组上敲除rihA基因、rihB基因、rihC基因、udk基因、udp基因、ppnN基因、nupG基因、nupC基因和iclR基因,异源引入枯草芽孢杆菌B.subtilis168中核糖磷酸焦磷酸激酶基因prs、乳清酸核苷单磷酸脱羧酶基因pyrF和乳清酸核糖基转移酶基因pyrE，过表达UMP磷酸水解酶基因umpH，并弱化尿苷酸激酶基因pyrH，其中，在ylbE和yeeP位点上先后整合核糖磷酸焦磷酸激酶基因prs，并用启动子PBBa_J23108调控，异源引入且双拷贝核糖磷酸焦磷酸激酶基因prs；在yjiT位点上整合UMP磷酸水解酶基因umpH，并用人工启动子Ptrc调控，所述UMP磷酸水解酶基因umpH核苷酸序列如序列表SEQIDNO.4所示，所述人工启动子Ptrc核苷酸序列如序列表SEQIDNO.5所示；用人工启动子PBBa_j23114替换尿苷酸激酶基因pyrH的天然启动子，所述尿苷酸激酶基因pyrH的核苷酸序列如序列表SEQIDNO.6所示，所述人工启动子PBBa_j23114的核苷酸序列如序列表SEQIDNO.7所示；在ilvG位点上整合乳清酸核苷单磷酸脱羧酶基因pyrF和乳清酸核糖基转移酶基因pyrE，并用启动子PBBa_J23100调控，所述启动子PBBa_J23100的核苷酸序列如序列表SEQIDNO.9所示；所述尿苷酸激酶基因pyrH的天然启动子核苷酸序列如序列表SEQIDNO.8所示。

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权利要求：

百度查询： 天津科技大学 一种尿苷生产菌株及其构建方法与应用