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申请/专利权人：苏州市药品检验检测研究中心(苏州市药品不良反应监测中心)

摘要：本发明提供了一种单克隆抗体注射液的高分辨质谱结构确证方法，具体步骤为：S1.单抗注射液变性稀释后进样，液相色谱进行分离，高分辨质谱一级质谱鉴定，建立完整分子量的测定方法，并对其结果进行解卷积确证解析；S2.将单抗注射液变性还原，烷基化后，液相色谱进行分离，高分辨质谱一级质谱鉴定，建立还原分子量的测定方法，并对其结果进行解卷积确证解析；S3.还原分子量样品酶切后，液相色谱进行分离，高分辨质谱二级质谱进行鉴定，建立氨基酸序列覆盖度的测定方法，并对其结果进行归属确证解析。该方法可以准确地确证单抗注射液的完整分子量、还原分子量、氨基酸序列覆盖度，专属性强、抗干扰能力强、测定过程简便直接。

主权项：1.一种单克隆抗体注射液的高分辨质谱结构确证方法，其特征在于，包括以下步骤：S1.完整分子量及糖基化修饰测定：取1000-3000μg单抗注射液蛋白，加入50-200μL5-8M尿素溶液，37℃反应0.5-3h，稀释10倍后，10000-13000rmin离心10-15min，取上清液，制得完整分子量样品，经液相色谱进行分离，高分辨质谱一级质谱鉴定，建立完整分子量的测定方法，并使用BIOFinder软件对其结果进行解卷积确证解析；S2.还原分子量及糖型测定：取1000-3000μg单抗注射液蛋白，加入50-200μL5-8M尿素溶液和3-10μL50-150mgmL二硫苏糖醇，37℃反应1h后，加碘乙酰胺烷基化15-60min，离心换液至1％碳酸氢铵后，10000-13000rmin离心10-15min，取上清液，制得还原分子量样品，经液相色谱进行分离，高分辨质谱一级质谱鉴定，建立还原分子量的测定方法，并使用BIOFinder软件对其结果进行解卷积确证解析；S3.氨基酸序列覆盖度测定：取S2中还原分子量样品，加入3-20μg酶，37-60℃超声酶切4-12h，加入5-10μL50％甲酸终止反应，10000-13000rmin离心10-15min，取上清液，经液相色谱进行分离，高分辨质谱二级质谱进行鉴定，建立氨基酸序列覆盖度的测定方法，并使用BIOFinder软件对其结果进行归属确证解析。

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