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申请/专利权人：杭州隽和控股集团有限公司
摘要：本发明涉及生物医药制备外泌体技术领域，具体涉及一种提高外泌体、类外泌体产量的方法。该方法包括：离心含有外泌体的培养液，获得上清液A和细胞沉淀；将细胞沉淀冻存用重悬，得到重悬分解液；再次离心获得分解上清液B和分解沉淀；用缓冲液重悬分解沉淀，进行物理挤压破碎，得到破碎悬液；离心破碎悬液，获得上清悬液C和破碎细胞沉淀；收集上清液A、分解上清液B、上清悬液C，得到含有大量外泌体及类外泌体的囊泡悬液。该方法包括三次操作，三次操作逐步的从同一批细胞中获得到外泌体以及类外泌体，得到的外泌体溶液中，总蛋白浓度远高于通过传统方法得到的外泌体。
主权项：1.一种提高外泌体、类外泌体产量的方法，其特征在于，包括：选取细胞进行贴壁培养，培养至细胞汇合率为60％-70％，进行外泌体分泌诱导培养，获得含有外泌体的培养液；在0℃-5℃下离心所述含有外泌体的培养液，获得含有外泌体的上清液A和细胞沉淀；将所述细胞沉淀于-180℃～-40℃下冻存0.25h-0.75h，得到细胞沉淀冻存物；向所述细胞沉淀冻存物中添加2-5倍体积的PBS缓冲液，在60kPa-100kPa下，将其置于超声环境中进行解冻，解冻时间为5min-10min，得到重悬分解液；在0℃-5℃下，以2500rmin-3000rmin的速度离心所述重悬分解液，获得分解上清液B和分解沉淀；用PBS缓冲液重悬所述分解沉淀，进行物理挤压破碎，得到破碎悬液；在0℃-5℃下离心所述破碎悬液，获得上清悬液C和破碎细胞沉淀；收集所述上清液A、所述分解上清液B、所述上清悬液C，混匀，得到含有大量外泌体及类外泌体的囊泡悬液。
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权利要求：
百度查询： 杭州隽和控股集团有限公司 一种提高外泌体、类外泌体产量的方法
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