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申请/专利权人：河北康腾生物科技有限公司
摘要：本发明涉及生物技术领域，公开了一种脐带源间充质干细胞外泌体制备方法及应用，制备方法包括如下步骤：S1：间充质干细胞培养；S2：超临界流体提取外泌体；S3：微流控芯片纯化外泌体；S4：磁性纳米颗粒富集外泌体；S5：外泌体的表征和储存；本发明提出的一种脐带源间充质干细胞外泌体的制备方法可显著提高外泌体制备的效率、纯度和生物活性。
主权项：1.一种脐带源间充质干细胞外泌体制备方法，其特征在于，包括如下步骤：S1：间充质干细胞的培养；将从脐带组织分离得到的间充质干细胞接种到人脂肪组织支架上，采用无血清培养基进行培养；S2：超临界流体提取外泌体；将培养后的人脂肪组织支架转移到超临界流体提取装置中，引入超临界二氧化碳流体作为提取介质，收集含有外泌体的超临界流体，通过降压和气液分离，获得富含外泌体的悬浮液；S3：微流控芯片纯化外泌体；将含有外泌体的悬浮液导入集成化微流控芯片系统，集成化微流控芯片系统包括微流控芯片，微流控芯片内设有滤膜和亲和纯化单元，可实现外泌体的连续分离和纯化；悬浮液首先通过滤膜，根据外泌体的尺寸差异，实现外泌体与其他杂质的初步分离，滤液再进入亲和纯化单元，该单元内固定有特异性识别外泌体表面标志物的抗体，外泌体与抗体特异性结合，杂质则被洗脱，实现外泌体的进一步纯化，收集纯化后的外泌体悬浮液；S4：磁性纳米颗粒富集外泌体；将纯化后的外泌体悬浮液与功能化磁性纳米颗粒混合，利用颗粒表面偶联的特异性抗体与外泌体表面标志物的亲和作用，实现外泌体的进一步富集；在外加磁场的作用下，结合了外泌体的磁性纳米颗粒被分离，而游离的杂质则被去除；洗脱并收集结合在磁性纳米颗粒上的外泌体，获得高纯度的外泌体制剂；S5：外泌体的表征和储存；对制备得到的外泌体进行形态学、粒径分布、蛋白质组成表征，将外泌体制剂分装后，在-80℃条件下长期保存，以维持其生物活性。
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