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申请/专利权人：贵州大学
摘要：本发明公开了一种可同时定量全基因组5‑甲基胞嘧啶和5‑羟甲基胞嘧啶的分析方法，包括如下步骤：从生物样品中提取DNA，合成含有内剪切酶识别序列的发夹探针；将提取的DNA经过氧化、重亚硫酸盐处理或只经过重亚硫酸盐处理；将非甲基化DNA经过重亚硫酸盐处理，作为非甲基化组；配置一系列不同比例的甲基化组；将甲基化组和非甲基化组与发夹探针杂交，再加入连接酶连接，然后经延伸、剪切、扩增，并带入荧光基团；计算甲基化组与未甲基化组荧光强度的差值，建立检测标准曲线；将该检测标准曲线用于检测待测样品的甲基化修饰水平。本发明能够在温和条件下即可实现全基因组DNA5mC和5hmC简单、快速、灵敏的检测目的。
主权项：1.一种可同时定量全基因组5-甲基胞嘧啶和5-羟甲基胞嘧啶的分析方法，其特征在于，包括如下步骤：从生物样品中提取DNA，该DNA含有5-甲基胞嘧啶和5-羟甲基胞嘧啶修饰位点，设计合成含有内剪切酶识别序列的发夹探针；将所提取的DNA经过氧化、重亚硫酸盐处理或只经过重亚硫酸盐处理，将非甲基化DNA经过重亚硫酸盐处理；分别配置一系列由不同比例的处理后的甲基化DNA与处理后的非甲基化DNA组成的甲基化组；取处理后的非甲基化DNA作为非甲基化组；将甲基化组和非甲基化组与发夹探针进行杂交，再加入T4DNA连接酶进行连接，然后在扩增反应体系的作用下进行延伸、剪切、扩增，并将荧光基团带入扩增后产物，检测甲基化组和非甲基化组的荧光强度；计算甲基化组与未甲基化组荧光强度的差值，以该差值为纵坐标，并以甲基化组中的甲基化DNA的占比为横坐标，建立检测标准曲线；将该检测标准曲线用于检测待测样品的5-甲基胞嘧啶和5-羟甲基胞嘧啶修饰水平。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 贵州大学 可同时定量全基因组5-甲基胞嘧啶和5-羟甲基胞嘧啶的分析方法
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