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申请/专利权人：西南大学
摘要：本发明公开了一种农杆菌介导的柑橘黄龙病抗性基因快速评价方法，包括步骤：S1、构建重组质粒：将拟评价基因插入表达载体中构建获得重组质粒；S2、重组质粒导入农杆菌：将重组质粒导入农杆菌中；S3、农杆菌侵染转化；S4、毛状根诱导；S5、转基因植株嫁接接种CLas病菌；S6、黄龙病抗性评价。本发明巧妙地设计了一套评价体系，将可能的抗性基因转到植株根部，然后再接种HLB病原，检测植株根部相关基因的表达和HLB含量的表达，从而判断该基因是否对HLB病菌有抗性，从而筛选出HLB病抗性基因，为后续转基因抗病育种奠定基础。采用本发明方法，首次验证了CB和HBD‑4基因对于HLB病菌有显著的抗性。
主权项：1.一种农杆菌介导的柑橘黄龙病抗性基因快速评价方法，其特征在于，包括如下步骤：S1、构建重组质粒：将拟评价基因插入表达载体中构建获得重组质粒；S2、重组质粒导入农杆菌：将步骤S1获得的重组质粒导入农杆菌中，将检测为阳性的克隆的菌液用于下一步的侵染转化；S3、农杆菌侵染转化：从柑橘树上剪取健康嫩枝，消毒后置于接种菌液中浸润接种；S4、毛状根诱导：将步骤S3接种后的柑橘枝条取出，用灭菌水清洗后将枝条种于培养介质中，黑暗培养20-28h，移至光照培养箱中，22-28℃按照光照黑暗14-18h6-10h进行培养，得到转基因柑橘枝条；S5、转基因植株嫁接接种CLas病菌：取步骤S4中毛状根生长良好的转基因柑橘枝条，在其上接种CLas病菌，接种方法为叶圆片嫁接、病芽嫁接、病枝嫁接或者木虱传播接种；S6、黄龙病抗性评价：在步骤S5转基因柑橘枝条接种CLas病菌后进行评价指标检测，所述评价指标包括检测转基因柑橘枝条毛状根中CLas含量，CLas含量显著低于空白对照的，则表明拟评价基因具有CLas抗性。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 西南大学 一种农杆菌介导的柑橘黄龙病抗性基因快速评价方法及抗菌肽在防治柑橘黄龙病中的应用
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