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申请/专利权人：杭州谷禾信息技术有限公司
摘要：本发明属于基因测序技术领域，涉及一种构建原核生物单细胞RNA测序文库的方法。本发明通过PolyA聚合酶选择性添加polyA的特性，无需单独rRNA去除步骤，简单的通过少数几条屏蔽引物即可去除绝大部分单细胞原核RNA测序文库中rRNA并完成原核mRNA的polyA添加。本发明使用VTN引物进行选择性反转录结合随机引物实现低成本、步骤简单的单细胞文库构建。
主权项：1.一种构建原核生物单细胞RNA测序文库的方法，其特征在于，包括下述步骤：（1）细胞处理：固定原核生物细胞，并进行细胞膜透化；（2）PolyA添加与rRNA屏蔽：通过PolyA聚合酶给RNA片段3’末端加上polyA序列，同时通过屏蔽引物特异性地阻断rRNA末端被加入polyA序列；所述屏蔽引物的序列为SEQIDNo.1~13所示；（3）反转录与第一轮标签添加：使用带有特定标签的核苷酸序列对添加polyA的RNA序列进行反转录，得到cDNA序列；所述带有特定标签的核苷酸序列为SEQIDNo.14所示；（4）第二轮标签添加：通过连接反应，利用互补连接接头序列将第二轮标签序列添加至第一轮得到的cDNA序列上，以进一步提高细胞UMI数量；所述互补连接接头序列为SEQIDNo.15所示，所述第二轮标签序列为SEQIDNo.16所示；（5）扩增与第三轮标签添加：使用带有标签的随机引物对步骤（4）得到的cDNA序列进行第二链生成并添加第三轮标签；（6）文库构建与扩增：对步骤（5）所得产物进行纯化处理后，通过测序通用引物进行扩增，构建适用于测序的文库。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 杭州谷禾信息技术有限公司 一种构建原核生物单细胞RNA测序文库的方法
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