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申请/专利权人：上海大学

摘要：本发明涉及一种基于同源重组的克罗诺杆菌基因敲除系统的构建方法与应用，构建方法的具体步骤如下：S1、将目的基因的上游同源臂和下游同源臂插入敲除质粒，构建含有目的基因同源臂的重组基因敲除载体，所述目的基因包括cpxR基因、adrA基因和bcsA基因，S2、将步骤S1中得到的重组基因敲除载体通过接合的方式转入克罗诺杆菌中，得到交换子；S3、将步骤S2中得到的交换子依次经过琼脂平板法和PCR验证，得到基因敲除突变体。与现有技术相比，本发明利用能够提高细胞通透性的特定分子量氨基寡糖、或者抗菌肽或者两者组合提高敲除质粒的转入效率；通过在培养基添加显色底物和特定的培养条件，快速筛选出基因敲除菌株。

主权项：1.一种基于同源重组的克罗诺杆菌基因敲除系统的构建方法，其特征在于，具体步骤如下：S1、将目的基因的上游同源臂和下游同源臂插入敲除质粒，构建含有目的基因同源臂的重组基因敲除载体，所述目的基因包括cpxR基因、adrA基因和bcsA基因，当目的基因为cpxR基因时，所述上游同源臂引物为cpxR-AFcpxR-AR，所述cpxR-AF的序列如SEQIDNO.10所示，所述cpxR-AR的序列如SEQIDNO.11所示，所述下游同源臂引物为cpxR-BFcpxR-BR，所述cpxR-BF的序列如SEQIDNO.12所示，所述cpxR-BR的序列如SEQIDNO.13所示，当目的基因为adrA基因时，所述上游同源臂引物为adrA-AFadrA-AR，所述adrA-AF的序列如SEQIDNO.16所示，所述adrA-AR的序列如SEQIDNO.17所示，所述下游同源臂引物为adrA-BFadrA-BR，所述adrA-BF的序列如SEQIDNO.18所示，所述adrA-BR的序列如SEQIDNO.19所示，当目的基因为bcsA基因时，所述上游同源臂引物为bcsA-AFbcsA-AR，所述bcsA-AF的序列如SEQIDNO.22所示，所述bcsA-AR的序列如SEQIDNO.23所示，所述下游同源臂引物为bcsA-BFbcsA-BR，所述bcsA-BF的序列如SEQIDNO.24所示，所述bcsA-BR的序列如SEQIDNO.25所示；S2、将步骤S1中得到的重组基因敲除载体通过接合的方式转入克罗诺杆菌中，得到交换子；S3、将步骤S2中得到的交换子依次经过琼脂平板法和PCR验证，得到基因敲除突变体。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 上海大学 一种基于同源重组的克罗诺杆菌基因敲除系统的构建方法与应用