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申请/专利权人：江苏省农业科学院

摘要：本发明公开了一种用于生产1‑羟基‑6‑甲氧基‑5,10‑二氧吩嗪的工程菌株及其构建方法与应用。本发明利用同源重组的方法敲除自抗性蛋白编码基因LaPhzX对抗生素溶杆菌（Lysobacterantibioticus）OH13进行改造得到稳定生产1‑羟基‑6‑甲氧基‑5,10‑二氧吩嗪的抗生素溶杆菌（Lysobacterantibioticus）OH13‑X1，使1‑羟基‑6‑甲氧基‑5,10‑二氧吩嗪在菌株培养至72h仍能维持较高产量，有望作为一种工程菌株应用于微生物农药的生产，为后续抗生素溶杆菌稳定生产1‑羟基‑6‑甲氧基‑5,10‑二氧吩嗪奠定基础，应用于农业生产具有重要意义。

主权项：1.一种用于生产1-羟基-6-甲氧基-5,10-二氧吩嗪的工程菌株，其特征在于，所述工程菌株以抗生素溶杆菌（Lysobacterantibioticus）OH13作为出发菌株，通过同源重组的方法敲除自抗性相关基因LaPhzX，即PCR扩增基因LaPhzX上下游序列，构建重组质粒后转入抗生素溶杆菌（Lysobacterantibioticus）OH13，获得LaPhzX敲除突变体，所得LaPhzX敲除突变体记为抗生素溶杆菌（Lysobacterantibioticus）OH13-X1；所述出发菌株抗生素溶杆菌（Lysobacterantibioticus）OH13已于2013年05月06日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心CGMCC，保藏登记号为：CGMCCNO.7561，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所；上述工程菌株的构建方法，包括以下步骤：生物信息学分析获得抗生素溶杆菌（Lysobacterantibioticus）OH13中LaPhzX基因及上下游序列，并PCR扩增上下游序列片段LaPhzX-sx，将LaPhzX-sx片段连接至质粒pJQ200sk构建LaPhzX敲除质粒pJQ200sk-LaPhzX，通过电击转化将pJQ200sk-LaPhzX导入抗生素溶杆菌OH13，筛选LaPhzX敲除的菌株，即为抗生素溶杆菌（Lysobacterantibioticus）OH13-X1，其中，所述LaPhzX基因序列如SEQIDNO:7所示，所述LaPhzX-sx序列如SEQIDNO:8所示。

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