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申请/专利权人：国药集团动物保健股份有限公司
摘要：本发明涉及细胞培养技术领域，具体涉及一种三维条件下诱导肝样细胞和胆管细胞生成的方法，本发明采用人源性分化末期的HepaRG细胞培养，既避免了采用动物细胞培养导致试验结果不准确又使其在细胞的功能和结构上最接近于人原代肝细胞；3D细胞培养使得肝细胞拥有了更加类似人体生理学的机械微环境，能够促进HepaRG细胞聚球体的诱导分化和生理代谢，本发明的诱导方法其诱导培养基成分丰富，为细胞的诱导提供充足的营养物质需求，同时减少了过量DMSO对细胞造成的不可逆损害，操作简单、诱导成功率更高，所需时间较短，适用性更广，旨在解决传统的诱导生成肝样细胞和胆管细胞的培养方法转化率低和操作复杂等问题。
主权项：1.一种三维条件下诱导肝样细胞和胆管细胞生成的方法，其特征在于，包括以下步骤：活化目标细胞；基于HepaRG细胞制得细胞悬液，并将其转入96孔超低吸附球形板中继续培养3-4天，形成HepaRG细胞聚球体；向预热后的DPBS中加入牛血纤维蛋白原，制得纤维蛋白原母液；将凝血酶溶解于DPBS中，制得凝血酶母液；配制添加有诱导分化因子的完全培养基；将所述HepaRG细胞聚球体、所述完全培养基、所述纤维蛋白原母液和所述凝血酶母液混合，制得混合细胞聚球体凝胶溶液；将所述混合细胞聚球体凝胶溶液注入微流控芯片中，恒温孵育至凝胶化后，向微流控芯片中加入添加所述完全培养基，构建3D细胞培养芯片；对所述3D细胞培养芯片进行连续培养，得到具有成熟肝样细胞和胆管细胞的细胞聚球体。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 国药集团动物保健股份有限公司 一种三维条件下诱导肝样细胞和胆管细胞生成的方法
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