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农大郁香猕猴桃的遗传转化方法 

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申请/专利权人:西北农林科技大学

摘要:本发明属于园艺技术领域,且公开了农大郁香猕猴桃的遗传转化方法,包括如下步骤:将目的载体转入GV3101农杆菌并进行培养,直至OD值为0.7‑0.8,获得菌液,并将菌液摇匀;选取长势健壮良好的30天苗龄农大郁香猕猴桃组培苗,在叶片背面划3‑5道伤口,置于预培养基中预培养预设时长;将S1中摇好的菌液,通过离心设备进行离心,离心后丢弃上清,并添加等倍体积的重悬液,并通过震荡设备震荡,获得悬浮液;本发明提供了农大郁香遗传体系的最佳预培养基、共培养基、筛选培养基、生芽培养基、生根培养基配方,同时对转基因植株进行RNA、DNA、蛋白水平鉴定阳性苗,建立了一套高效准确的美味系猕猴桃遗传转化体系,对猕猴桃的分子育种具有重要意义。

主权项:1.农大郁香猕猴桃的遗传转化方法,其特征在于:包括如下步骤:S1:将目的载体转入GV3101农杆菌并进行培养,直至OD值为0.7-0.8,获得菌液,并将菌液摇匀;S2:选取长势健壮良好的30天苗龄农大郁香猕猴桃组培苗,在叶片背面划3-5道伤口,置于预培养基中预培养预设时长;S3:将S1中摇好的菌液,通过离心设备进行离心,离心后丢弃上清,并添加等倍体积的重悬液,并通过震荡设备震荡,获得悬浮液;S4:将预培养基中的叶片置于悬浮液中浸泡十分钟后取出叶片,然后在滤纸上吸干叶片上的菌液,再将叶片背面朝上平铺于共培养基上,黑暗培养预设时长;S5:再将叶片放置于筛选培养基中,直至叶片切口处分化出愈伤组织;S6:待叶片表面愈伤组织长到预设大小后,将愈伤组织转移到生芽培养基中进行促进生芽,生芽4周后,提取植株叶片的RNA、DNA、蛋白,进行RNA、DNA、蛋白水平鉴定阳性苗;S7:将阳性苗转移至生根培养基,进行生根培养,并移栽。

全文数据:

权利要求:

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