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申请/专利权人:广东石油化工学院
摘要:一种基于Hemin‑Cu‑MOF纳米复合材料构建夹心型双信号适配体传感器检测GP73的方法,AuNPs修饰在SPCE电极表面,通过Au‑SH键将AptⅡ固定在SPCE。Hemin‑Cu‑MOF纳米复合材料不仅能通过酰胺反应固定AptⅠ,构建Hemin‑Cu‑MOF‑AptⅠ信号探针,而且Hemin,Cu‑MOF作为电活性物质发生氧化还原反应,产生氧化还原峰值。因此,由于GP73能够与适配体特异性结合,形成稳定的夹心型结构,成功构建了GP73夹心型双信号电化学适配体传感器。通过电化学工作站的DPV进行扫描,记录其峰电流强度,实现对GP73的检测,最低检测限为0.625ngmL。
主权项:1.一种基于Hemin-Cu-MOF纳米复合材料构建夹心型双信号适配体传感器检测GP73的方法,按以下步骤进行:步骤1:Hemin-Cu-MOF-AptⅠ信号探针的制备1Cu-MOF的制备将CuNO32·3H2O和TA以1:1.4的比例溶解在DMF中,150℃反应;离心,收集晶体,得Cu-MOF固体;将所述Cu-MOF固体分散于超纯水中,即可得Cu-MOF溶液;2Hemin-Cu-MOF的制备将Cu-MOF溶液与Hemin溶液混合,加入氨水溶液及NH2-NH2溶液,振荡,水浴搅拌,离心,洗涤,得到Hemin-Cu-MOF纳米复合材料;3Hemin-Cu-MOF-AptⅠ的制备将氨基修饰GP73适配体AptⅠ和Hemin-Cu-MOF溶液超声混合,孵育;加入NaCl溶液,离心,得到Hemin-Cu-MOF-AptⅠ信号探针;步骤2:电极的修饰与生物传感界面的构建1将SPCE置于稀H2SO4溶液中活化;2将活化后的SPCE置于含有HAuCl4的混合液中,进行电沉积,得到AuNPsSPCE电极;3将巯基修饰GP73适配体AptⅡ滴加在AuNPsSPCE的表面,孵育、洗涤、晾干,得到AptⅡAuNPsSPCE电极;4将GP73标准液滴加到AptⅡAuNPsSPCE表面,孵育、清洗、晾干,得到GP73AptⅡAuNPsSPCE电极;5在GP73AptⅡAuSPCE上滴加Hemin-Cu-MOF-AptⅠ溶液,孵育、清洗、晾干,得到Hemin-Cu-MOF-AptⅠGP73AptⅡAuNPsSPCE电极;步骤3:GP73工作曲线的绘制1将步骤2的工作电极置于磷酸缓冲盐溶液PBS中,采用电化学工作站的DPV进行扫描,记录传感器Hemin和Cu-MOF的峰值电流强度;2分别对不同浓度的GP73标准液进行检测,记录传感器Hemin和Cu-MOF的峰值电流强度,根据传感器Hemin和Cu-MOF峰值电流强度比值与GP73浓度的关系,并绘制出标准工作曲线;计算出该方法的最低检测限;步骤4:实际血清样本中GP73的检测1将实际血清样品加入到步骤2的3工作电极上,孵育后将电极浸入PBS缓冲溶液中,采用DPV检测技术进行扫描,同时设置空白组,记录峰值电流强度;2根据步骤3所得到的工作曲线,计算得到所述待测实际样品中GP73的浓度。
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