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申请/专利权人：睿丰康生物医药科技(浙江)有限公司

摘要：一种基于VSV载体的新型冠状病毒核酸诊断假病毒质控品,利用复制缺陷型水泡性口炎病毒载体系统，制备包括且不限于新型冠状病毒核酸序列的假病毒用于核酸检测的标准质控品。还公开了质控品的制备方法，包括：目的靶标基因的PCR扩增；PCR产物的酶切与回收；目的靶标基因与病毒载体的连接；将病毒质粒转化入大肠杆菌进行培养；病毒质粒提取；病毒拯救包装。本发明提供的新型冠状病毒RNA核酸检测质控品，与实际病毒颗粒具有结构一致性，耐RNA酶、无DNA残留，能更真实地模拟病毒从RNA提取至核酸扩增检测步骤的全过程，实现对2019‑nCoV核酸检测的全方位监控，控制核酸检测结果的准确性与可靠性。

主权项：1.一种基于重组VSV病毒载体的新型冠状病毒核酸检测诊断假病毒质控品的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）目的靶标基因的PCR扩增；（2）目的靶标基因PCR产物和VSV病毒载体的酶切与回收；（3）目的靶标基因与VSV病毒载体的连接，目的靶标基因可正向或反向插入到VSV病毒载体中EGFP基因上游或下游的偶联克隆位点；（4）将携带目的靶标基因的重组VSV病毒载体转化入大肠杆菌进行培养；（5）携带目的靶标基因的重组VSV病毒载体质粒提取；（6）携带目的靶标基因的重组VSV病毒拯救包装；所述病毒载体为水疱性口炎病毒，所述目的靶标基因为新型冠状病毒N基因SEQIDNO:1；利用所述病毒载体pVSV-RNA-Amplicon或pVSV-RNA-G-Amplicon通过病毒拯救包装分别获得可复制型假病毒或复制缺陷型假病毒；所述病毒载体pVSV-RNA-Amplicon是由VSV大蛋白基因L、T7终止子、Rop蛋白基因、pBR322bom基因片段、pBR322复制起始区ori、卡那霉素抗性基因KanR、氨苄青霉素抗性基因启动子、T7启动子、VSV核蛋白基因N、VSV磷酸化蛋白基因P、VSV基质蛋白基因M、加强绿色荧光蛋白基因EGFP元件依次构成；所述病毒载体pVSV-RNA-G-Amplicon是由VSV大蛋白基因L、T7终止子、Rop蛋白基因、pBR322bom基因片段、pBR322复制起始区ori、卡那霉素抗性基因KanR、氨苄青霉素抗性基因启动子、T7启动子、VSV核蛋白基因N、VSV磷酸化蛋白基因P、VSV基质蛋白基因M、VSV囊膜糖化蛋白基因VSV-G、加强绿色荧光蛋白基因EGFP元件依次构成。

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