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申请/专利权人:南京市第一医院
摘要:本发明提供一种基于恒温扩增的肺炎支原体及其耐药基因检测方法,采用前述引物组合,使用LAMP法对待测样本中包含MP耐药位点的23SrRNA基因片段进行扩增,扩增体系中添加pH指示剂,扩增结束后,当扩增体系颜色由紫色变为黄色,则待测样品为肺炎支原体阳性,当扩增体系颜色保持紫色,则待测样品为肺炎支原体阴性;当S1检测结果为肺炎支原体阳性,将S1得到的扩增产物与DNA探针、银离子及还原剂混合,孵育,形成银纳米簇产生荧光;在540nm激发波长下照射观察,当混合体系未发生荧光猝灭,则待测样品中的肺炎支原体为野生型;当混合体系发生荧光减弱,则待测样品中的肺炎支原体为突变型。该方法可以恒温完成扩增和基因识别,结果可直接通过肉眼进行判读,保持高灵敏度的同时操作更加简便。
主权项:1.基于恒温扩增检测肺炎支原体及其耐药基因的检测引物组合,其特征在于,所述检测引物组合包括:上游外引物F3:AGGTTAGCGCAAGCGAAG;下游外引物B3:AACTTGCATCGATTGCTCCT;上游内引物FIP:TGGTTACACCATTCAAGCGGGAGGCCGTAACTATAACGGTCC;下游内引物BIP:CTCGGTGAAATCCAGGTACGGGAGTAAAGCTTCACGGGGTCT;下游环状引物LB:TTAGGCGCAACGGGACG。
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权利要求:
百度查询: 南京市第一医院 一种基于恒温扩增的肺炎支原体及其耐药基因检测方法
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