龙图腾网&IPTOP
- 微信扫码登录
- 账号密码登录
- 短信登录/注册
买专利卖专利找龙图腾，真高效！ 查专利查商标用IPTOP,全免费！专利年费监控用IP管家,真方便！
申请/专利权人：山东大学
摘要：本发明公开了一种基于荧光素酶与CRISPR‑Cas系统的RNA检测方法及检测试剂盒，属于核酸检测技术领域。本发明通过转肽酶或SpyTag‑SpyCatcher系统，将底物蛋白Csx30与荧光素酶相结合，获取荧光素酶‑底物蛋白复合物，融合了RNA介导的底物蛋白切割特性与荧光素酶的高灵敏度发光特性；然后以荧光素酶‑底物蛋白复合物作为特异性底物，以Craspase蛋白酶作为蛋白切割工具，对待测样本进行RNA检测。本发明的检测方法经济、简单，不依赖PCR仪且无需专用设备提供激发光，使用普通发光检测仪即可实现检测，检测成本低，具有广阔的应用前景。
主权项：1.一种荧光素酶-底物蛋白复合物的组装方法，其特征在于，包括如下步骤：S1、构建荧光素酶的低亲和力激活片段SmBiT和C端带有LPETGG的主体片段LgBiT的融合表达载体，转化大肠杆菌并在诱导表达后破碎菌体，纯化获得SmBiT-LgBiT-LPETGG融合蛋白；S2、构建III-E型CRISPR-Cas系统的N端带有GGG的底物蛋白Csx30和荧光素酶的高亲和力抑制片段HiBiTm的融合表达载体，转化大肠杆菌并在诱导表达后破碎菌体，纯化获得GGG-底物蛋白Csx30-HiBiTm融合蛋白；S3、利用转肽酶将SmBiT-LgBiT-LPETGG融合蛋白与GGG-底物蛋白Csx30-HiBiTm融合蛋白进行共价偶联，即得；或，S1、构建NLuc与III-E型CRISPR-Cas系统的底物蛋白Csx30以及SpyTag的融合表达载体，转化大肠杆菌并在诱导表达后破碎菌体，纯化获得NLuc-底物蛋白Csx30-SpyTag融合蛋白；S2、构建SpyCatcher与4×peptide融合表达载体，转化大肠杆菌并在诱导表达后破碎菌体，纯化获得SpyCatcher-4×peptide融合蛋白；S3、将SpyCatcher-4×peptide与羧基磁珠偶联后与NLuc-底物蛋白Csx30-SpyTag融合蛋白进行共价连接，即得。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 山东大学 一种基于荧光素酶与CRISPR-Cas系统的RNA检测方法及检测试剂盒
免责声明
1、本报告根据公开、合法渠道获得相关数据和信息，力求客观、公正，但并不保证数据的最终完整性和准确性。
2、报告中的分析和结论仅反映本公司于发布本报告当日的职业理解，仅供参考使用，不能作为本公司承担任何法律责任的依据或者凭证。
主营中国专利交易买卖与专利转让许可,高校科技成果推广与科技成果转化,知识产权运营管理与平台开发,科技人才专家库与科技猎头等科技服务
开放平台
担保交易
惠及多方
会员特惠
专属平台
适合多方
数据共享
功能齐全
皖公网安备 34010402703815号