龙图腾网&IPTOP
- 微信扫码登录
- 账号密码登录
- 短信登录/注册
买专利卖专利找龙图腾，真高效！ 查专利查商标用IPTOP,全免费！专利年费监控用IP管家,真方便！
申请/专利权人：华侨大学
摘要：本发明公开了一种基于结构的糖基转移酶的linker筛选方法，属于半理性设计对酶改造技术领域。本发明从天然糖基转移酶中筛选得到天然linker序列，通过AlphaFold2预测构建嵌合体模型，利用分子动力学模拟、分子对接等生信方法对嵌合体进行评估筛选，将筛选的嵌合体序列，送至公司合成序列，经过菌株培养，糖基转移酶表达与纯化，在加入EpoB和糖供体情况下，嵌合体糖基转移酶若能够催化糖受体EpoB进行糖基化则证明linker选择正确。本发明确定了基于生信手段对构建的嵌合体进行筛选的方法。本发明操作方便，原理简单，在生物催化制备EpoB糖基化衍生物具有较好的工业应用前景，对于今后酶改造与设计的开发提供了新的思路，并且对抗肿瘤药物的修饰与研发具有较为重要的意义。
主权项：1.一种糖基转移酶天然linker筛选的方法，其特征在于，包括：将糖基转移酶BsGT-1的N端结构域序列取出，使用寻找到的天然linker将其与糖基转移酶FiGT-2的C端结构域序列连接起来从而得到了具有完整结构域的嵌合体；通过AlphaFold2对所有的嵌合体进行蛋白质结构预测，在输出的结构中依照排名选取前三个模型进行分析，并对模型进行质量评估，选取可信度最高的模型进入下一步；使用GROMACS软件进行分子动力学模拟，通过均方根偏差和回旋半径分析评估嵌合体的稳定性，根据稳定性对所有的嵌合体进行第一轮筛选，得到第一嵌合体例表；使用AutoDockVina_1.2.3将糖供体与糖受体对接到嵌合体的活性口袋中，通过结合能比较确定底物与嵌合体的亲和程度，根据亲和程度对所有的嵌合体进行第二轮筛选，得到第二嵌合体例表；综合第一嵌合体例表和第二嵌合体例表，选取一个嵌合体进行基因合成，经培养、收菌得到粗酶液；在粗酶液中，加入尿苷二磷酸葡萄糖作为糖供体，加入埃博霉素B作为糖受体，进行酶催化反应；若催化得到糖基化产物，则证明linker选择正确，若无法催化则证明linker选择错误，应另选其它linker。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 华侨大学 一种糖基转移酶天然linker筛选的方法
免责声明
1、本报告根据公开、合法渠道获得相关数据和信息，力求客观、公正，但并不保证数据的最终完整性和准确性。
2、报告中的分析和结论仅反映本公司于发布本报告当日的职业理解，仅供参考使用，不能作为本公司承担任何法律责任的依据或者凭证。
主营中国专利交易买卖与专利转让许可,高校科技成果推广与科技成果转化,知识产权运营管理与平台开发,科技人才专家库与科技猎头等科技服务
开放平台
担保交易
惠及多方
会员特惠
专属平台
适合多方
数据共享
功能齐全
皖公网安备 34010402703815号