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申请/专利权人：北京百普赛斯生物科技股份有限公司
摘要：本申请涉及生物技术领域，具体涉及一种VSV△G复制缺陷型种子病毒的制备方法及其在假病毒制备中的应用。该方法具有材料获取容易、工艺简单实用和安全性高等特点，同时还具有信号产生快和强度高等优势。
主权项：1.一种VSV△G复制缺陷型种子病毒的制备方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：1）包装细胞构建：构建表达噬菌体T7RNA聚合酶的细胞株；2）辅助质粒构建：分别构建T7启动子连接VSV病毒N、P、L和G蛋白编码基因的表达载体；3）基因组质粒构建：构建T7启动子接VSV病毒基因组的载体，所述VSV病毒基因组中的G蛋白编码基因被替换；4）种子病毒制备：将辅助质粒和基因组质粒导入包装细胞中，收获VSV△G复制缺陷型种子病毒；5）种子病毒扩增：将步骤4）制备的VSV△G复制缺陷型种子病毒再次侵染原始细胞株，同时添加VSV病毒G蛋白表达质粒；步骤1）中，所述细胞株为HEK293细胞株、HeLa细胞株或Vero细胞株；所述构建的方式包括：将CMV或CBV启动子连接T7RNA聚合酶基因CDS序列，通过质粒瞬时转染或慢病毒载体导入HEK293细胞株、HeLa细胞株或Vero细胞株；步骤2）中，所述T7启动子与蛋白编码基因之间连接有内部核糖体进入位点IRES序列；所述IRES可操作的连接在T7启动子序列之后；步骤3）中，所述替换为将VSV病毒基因组中的G蛋白编码基因替换为萤火虫萤光素酶报告基因；步骤5）中，所述原始细胞株为HEK293细胞株、HeLa细胞株或Vero细胞株；所述VSV病毒G蛋白表达质粒为真核启动子连接VSV病毒G蛋白编码基因的表达质粒。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 北京百普赛斯生物科技股份有限公司 VSV△G复制缺陷型病毒制备及应用
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