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申请/专利权人：广东石油化工学院

摘要：一种基于BNCQDs和DAP构建的双色适配体荧光探针检测GP73的方法，以BNCQDs和DAP为荧光信号，Cu‑MOF‑Apt为催化剂和识别分子，构建了BNCQDsCu‑MOF‑AptDAP双色适配体荧光探针。检测GP73时，GP73与GP73Apt的特异性结合使得Cu‑MOF的类过氧化物酶活性降低，从而造成DAP荧光强度I560的降低和BNCQDs荧光强度的升高I445，通过两者的比值I445I560实现对GP73的线性检测。此方法通过另一个荧光信号的引入，大幅降低了仪器和环境噪音的影响；同时，GP73Apt使此方法具有特异性，也使得本研究中涉及到的检测方法可以扩展至其他血清标志物的检测。

主权项：1.一种基于BNCQDs和DAP构建的双色适配体荧光探针检测GP73的方法，按以下步骤进行：步骤1：荧光分子BNCQDs的制备以柠檬酸为碳源、硼酸为硼源、乙二胺为氮源，水热法合成了未提纯的硼氮共掺杂碳量子点BNCQDs，经过透析提纯和过滤，得到了BNCQDs溶液，进一步通过真空干燥箱干燥过夜，得到BNCQDs粉末；步骤2：识别分子和催化剂Cu-MOF-Apt的合成1铜金属有机框架Cu-MOF的制备：以硝酸铜和对苯二甲酸为前驱体，溶解在N,N-二甲基甲酰胺DMF中，通过水热法合成了Cu-MOF；用超纯水和无水乙醇交替洗涤后干燥，得到Cu-MOF粉末；2结合了高尔基体蛋白73适配体GP73Apt的铜金属有机框架Cu-MOF-Apt的合成：利用1-乙基-3-二甲基氨基丙基碳酰二亚胺和N-羟基琥珀酰亚胺EDCNHS活化Cu-MOF上的羧基，并与修饰了氨基的GP73Apt溶液混合，孵育后得到Cu-MOF-Apt溶液；步骤3：实际血清样本中GP73水平的检测1将Cu-MOF-Apt溶液与不同浓度的GP73蛋白溶液混合并孵育，使GP73与GP73Apt充分结合；2在1的溶液中依次加入BNCQDs、邻苯二胺OPD和过氧化氢H2O2溶液，并加入醋酸缓冲液HAc-NaAc以平衡溶液的pH，避光孵育后用荧光分光光度计进行扫描，观察荧光光谱，并记录在445nm和560nm处的荧光强度I445和I560；3以I445I560为因变量，GP73浓度为自变量，对测量出的数据进行线性拟合，并计算最低检测限，由此便实现了BNCQDsCu-MOF-AptDAP双色适配体荧光探针对GP73的检测，其中2,3-二氨基吩嗪DAP为OPD被氧化后的产物；步骤4：实际血清样本中GP73水平的检测1在三份健康人群的血清样本中分别加入不同浓度的GP73蛋白，并分别于步骤2中的Cu-MOF-Apt溶液混合并孵育；2在1的溶液中依次加入BNCQDs、OPD和H2O2溶液，并加入HAc-NaAc缓冲液以平衡溶液的pH，避光孵育后用荧光分光光度计进行扫描，观察荧光光谱，并记录在445nm和560nm处的荧光强度I445和I560；3根据步骤3中得到的线性曲线，计算出所测血清样本中GP73的浓度，并与加标浓度进行对比以观察双色适配体荧光探针在检测实际样本时的性能。

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